灵巴菌质碱性醇提物体外抑制a549细胞增殖的作用.pdf

南京中医药大学学报 2013年 7月第 29卷第 4期 362 J(X~NALOFNANJINGUⅥⅥRS仃YOF1口ⅥVo1．四No．4Jed．2013 灵巴菌质碱性醇提物体外抑制 A549细胞增殖的作用 及机制 剥、钰 ，彭薇 ，潘扬 ，张弦 ，蒋亚平 (南京中医药大学药学院，江苏南京 210023) 摘要 ：目的 通过体外细胞培养探讨灵 巴菌质的碱性醇提物对人肺癌细胞 A549增殖的抑制作用及相关机制。方法 对灵 巴 菌质的甲醇提取部位采用酸溶碱沉一溶剂萃取等方法处理，得到其碱性醇提物 ，HPLC法定性鉴定 巴豆苷的存在 。进而通过 MTT 比色法、软琼脂克隆形成法、PI单染法和免疫荧光染色法观察其对 A549细胞 的增殖抑制、成瘤能力、生长周期分布及细 胞骨架损伤程度 的影响。结果 灵 巴茵质的碱性醇提物含有抗癌活性成分 巴豆苷 ，它能够显著抑制 A549细胞 的增殖 ，降低 细胞克隆形成的能力 ，能将这种细胞 的生长阻滞在 G：期 ，并对其细胞骨架造成一定的损伤 。结论 灵 巴菌质的碱性醇提物 具有体外抑制 A549细胞增殖的效应 ，其作用机制可能与降低细胞克隆形成能力及损伤细胞骨架有关。 关键词 ：巴豆；发酵 ；碱 性醇提 物 ；A549细胞 ；抗肿瘤 ；作用机制 中图号 ：R285．5 文献标志码 ：A 文章编号 ：1672—0482(20I3)O4—0362一O6 ProliferativeinhibitioneffectsofLingbaJunzhialkalineconstituentsonhumannon。s‘mallcelllungcancerA549cellsanditsmecha。_ nism SUN Yu，PENG Wei，PAN Yang ，ZHANG Xian，JIANG Ya—ping choolofPharmacy，NanjingUniversityofChineseMedicine，Nanjing，210023，China) ABSTRACT：OBJECTIVE ToexploretheproliferativeinhibitioneffectsofLingbaJunzhialkalineconstituentsonhumannon— smallcelllungcancerA549 cellsanditsmechanism via invitrocellculture．METHODS Thealkalineconstituentswereob tainedbyalkali—solutionandacid—isolationextraction，andsolventextraction ofLingbaJunzhimethylalcoholextractparts； HPLC wasappliedtOverifytheexistenceofCrontonside．MTT assay．softagaragarassay．PT single—stainandimmunofluo— rescentstainingwerelaterusedtOobserveitseffectson inhibitingA549cellproliferation，tumorformation，growthcycledis tributionandcytoskeletondestruction．RESULTS CrontonsidedidexistinLingbaJunzhialkalineconstituents，whichsignifi— cantlyinhibitedA549proliferationandreducedcellcloneformation，delayedthecellcircleinG2periodandcausedcertaindam agetothecytoskeleton．CONCLUSION LingbaJunzhialkalineconstituentscaninhibitinvitroA549cellproliferationandits mechanism mayberelatedtO itsdecreasingcloneformationabilityanddamagingcytoskeleton． KEY WORDS：Crotontiglium ；ferm