乳糖诱导高分子量重组蛛丝蛋白发酵培养基优化 - 生物通.pdf

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００８，２８（１２）：４１～４６ 乳糖诱导高分子量重组蛛丝蛋白发酵培养基优化 郑　剑　吴琳琳　李　敏 （福建师范大学生命科学学院　福州　３５０１０８） 摘要　在Ｍ９基础培养基的基础上，以乳糖为诱导剂，对基因重组蛛丝蛋白工程菌ｐＮＳＲ３２／ＢＬ２１ （ＤＥ３）的发酵培养基进行了优化。利用单因子实验和正交试验优化出表达高分子量重组蛛丝蛋 白的最优培养基配方，结果表明：优化的碳源为０．３％的甘油，氮源为３％的酵母膏、０．７５％的蛋白 胨和０．０５％（ＮＨ）ＳＯ及少量的无机盐。优化培养基有利于菌体的生长和目的蛋白的表达，表 ４ ２ ４ 达重组蛛丝蛋白达总蛋白量的２０％。 关键词　重组蛛丝蛋白　发酵　乳糖培养基　优化 中图分类号　Ｑ９３３３５ ? 　　无论是强度还是延伸性、韧性，蜘蛛丝都表现出优 高密度培养的目的，更加适合大规模发酵，对工业化生 于现有人造及天然纤维。单位重量蜘蛛拖丝的强度是 产具有十分重要的意义。由于采用乳糖作为诱导剂， 人造纤维的３倍，钢材的５倍，而弹性却是尼龙的２倍， 菌体的生长和表达特性将有所改变，在此基础之上，本 ［１，２］ 这种强度和弹性的组合是其它纤维所不具备的 ，因 文设计优化出适合ｐＮＳＲ３２／ＢＬ２１（ＤＥ３）工程菌高密度 此，蜘蛛丝受到了各个领域研究者的关注。蜘蛛丝的 生长和高表达的培养基。 主要成分是纤维蛋白质，目前报道发现的蛛丝蛋白分 ［３］ １　材料与方法 子量约１００～７５０ｋＤａ ，其序列高度重复，小侧链丙氨 ［４］ 酸和甘氨酸的重复分别达到２５％和４２％ 。 １．１　材　料 　　基因工程技术为重组蛛丝蛋白的获得提供了很好 １．１．１　菌　株　重组 ＲＧＤ蛛丝蛋白基因工程菌 的渠道，蛛丝蛋白的表达系统涉及大肠杆菌、酵母、土 ｐＮＳＲ３２／ＢＬ２１（ＤＥ３）为本室构建保存。 豆、烟草以及高等动物的奶牛和山羊等，但都存在表达 １．１．２　主要仪器　电泳仪 ＭｉｎｉＰＲＯＴＥＡＮＩＩＩ为ＢＩＯ ? ? 量低，成本高的问题，很难实现大规模生产，给后续的 ＲＡＤ产品。 应用研究带来困难。本室已经成功构建高分子量蛛丝 １．１．３　培养基　ＬＢ培养基（ｇ／Ｌ）：胰蛋白胨 １Ｏ，酵母 蛋白基 因工程菌［５～７］，本文研究 的 ｐＮＳＲ３２／ＢＬ２１ 粉５，ＮａＣｉ１０，ｐＨ７．０。 （ＤＥ３）工程菌表达重组蛛丝蛋白分子量在 １０４ｋＤａ左 　　 Ｍ９培养基 （ｇ／Ｌ）：ＮＨ Ｃｌ５．０，ＫＨ ＰＯ １５， ４ ２ ４ 右。由于蜘蛛丝独特的编码序列，含有大量的丙氨酸 ＮａＨＰＯ ·７ＨＯ６４，ＮａＣｌ２．５，ＭｇＳＯ ０．２４（单独灭 ２ ４ ２ ４ 和甘氨酸密码子，以及较大的分子量，其在原核中高表 菌），葡萄糖（单独灭菌）４．０，ｐＨ７．０。 达比较困难。ＩＰＴＧ是乳糖操纵子最常用和十分有效的 １．１．４　主要试剂　酵母粉、蛋白胨、乳糖系ＢＢＩ公司 诱导剂，但对人体具有潜在的毒性，有可能给最终作为