结直肠癌细胞中rad18与fancd2蛋白相互作用的实验研究 - 胃肠病学.pdfVIP

胃肠病学２０１４年第１９卷第１１期 ·６６５· 结直肠癌细胞中ＲＡＤ１８与 ＦＡＮＣＤ２蛋白 相互作用的实验研究 ＃ 乐贻军　王　红 　钟雄平　刘　超　陈业金 广州医科大学附属广州市第一人民医院消化科（５１０１８０） 　　背景：范可尼贫血（ＦＡ）通路作为ＤＮＡ交联损伤修复的主要通路在维持染色体稳定性方面起重要作用。近年 来，有关ＦＡ通路在ＤＮＡ损伤以及肿瘤发病机制等方面的研究越来越多。目的：研究人结直肠癌细胞株ＳＷ４８０中 ＲＡＤ１８蛋白与ＦＡＮＣＤ２蛋白是否存在相互作用。方法：应用免疫共沉淀法沉淀抗原抗体复合物；应用蛋白质印迹 法检测复合物中兔抗人ＦＡＮＣＤ２和ＲＡＤ１８蛋白的表达。将ＧＳＴＲＡＤ１８和ＧＳＴ质粒分别转化到ＢＬ２１细菌中诱导 目的蛋白表达，提取细菌总蛋白，以ＧＳＴ琼脂糖珠结合ＧＳＴＲＡＤ１８蛋白，与ＳＷ４８０细胞裂解液孵育后，加入兔抗人 ＦＡＮＣＤ２抗体，进行蛋白质印迹检测。结果：在利用ＦＡＮＣＤ２抗体沉淀下来的复合物中可检测到ＲＡＤ１８蛋白，且在 利用ＲＡＤ１８抗体沉淀下来的复合物中可检测到ＦＡＮＣＤ２蛋白；ＧＳＴＲＡＤ１８蛋白作诱饵蛋白时可以捕获ＳＷ４８０细 胞中的ＦＡＮＣＤ２蛋白。结论：ＲＡＤ１８蛋白与 ＦＡＮＣＤ２蛋白在 ＳＷ４８０细胞内存在相互作用；ＧＳＴＲＡＤ１８蛋白与 ＦＡＮＣＤ２蛋白也存在相互作用。 关键词　结直肠肿瘤；　细胞；　范可尼贫血互补群蛋白质Ｄ２；　免疫沉淀法 ＲｅｓｅａｒｃｈｏｎＩｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎＲＡＤ１８ａｎｄＦＡＮＣＤ２ＰｒｏｔｅｉｎｓｉｎＣｏｌｏｒｅｃｔａｌＣａｎｃｅｒＣｅｌｌｓ　ＬＥＹｉｊｕｎ，ＷＡＮＧ Ｈｏｎｇ，ＺＨＯＮＧＸｉｏｎｇｐｉｎｇ，ＬＩＵＣｈａｏ，ＣＨＥＮＹｅｊｉｎ．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＧａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，ＧｕａｎｇｚｈｏｕＦｉｒｓｔＭｕｎｉｃｉｐａｌＰｅｏｐｌｅ’ｓ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，ＧｕａｎｇｚｈｏｕＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ（５１０１８０） Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｅｎｃｅｔｏ：ＷＡＮＧＨｏｎｇ，Ｅｍａｉｌ：ｗｏｎｇ．ｈｏｎｇ＠１６３．ｃｏｍ 　　Ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄ：Ｆａｎｃｏｎｉａｎｅｍｉａ（ＦＡ）ｐａｔｈｗａｙａｓａＤＮＡｃｒｏｓｓｌｉｎｋｄａｍａｇｅｒｅｐａｉｒｐａｔｈｗａｙｐｌａｙｓａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔｒｏｌｅｉｎ ｍａｉｎｔａｉｎｉｎｇｇｅｎｏｍｅｓｔａｂｉｌｉｔｙ．Ｉｎｒｅｃｅｎｔｙｅａｒｓ，ＦＡｐａｔｈｗａｙｗａｓｗｉｄｅｌｙｓｔｕｄｉｅｄｉｎＤＮＡｄａｍａｇｅａｎｄｃａｎｃｅｒｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ． Ａｉｍｓ：ＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎＲＡＤ１８ａｎｄＦＡＮＣＤ２ｐｒｏｔｅｉｎｉｎｈｕｍａｎｃｏｌｏｒｅｃｔａｌｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｌｉｎｅＳＷ４８０． Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ａｎｔｉｇｅｎａｎｔｉｂｏｄｙｃｏｍｐｌｅｘｗａｓｃｏｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｅｄｂｙｉｍｍｕｎｏｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｏｆｒａｂｂｉｔａｎｔｉｈｕｍａｎ ＦＡＮＣＤ２ａｎｄＲＡＤ１８ｐｒｏｔｅｉｎｉｎａｎｔｉｇｅｎａｎｔｉｂｏｄｙｃｏｍｐｌｅｘｅｓｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ．ＴｈｅｐｌａｓｍｉｄｓｏｆＧＳＴ ＲＡＤ１８ａｎｄＧＳＴｗｅｒｅｔｒａｎｓｆｅｒｒｅｄｉｎｔｏＢＬ２１ｃｅｌｌｓａｎｄｉｎｄｕｃｅｄｔｏｅｘｐｒｅｓｓｔｈｅｔａｒｇｅｔｐｒｏｔｅｉｎｓ．Ｔｏｔａｌｐｒｏｔｅｉｎｓｏｆｔｈｅｃｅｌｌｗａｓ ｅｘｔｒａｃｔｅｄａｎｄＧＳＴｂｅａｄｓｗｅｒｅｕｓｅｄｔｏｃｏｎｊｕｇａｔｅｔｈｅＧＳＴＲＡＤ１８ｐｒｏｔｅｉｎ，ａｎｄｔｈｅｎｉｎｃｕｂａｔｅｄｗｉｔｈｔｈｅＳＷ４８０ｃｅｌｌｌｙｓａｔｅｓ， ａｎｄＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇｗａｓｐｅｒｆｏｒｍｅｄｗｉｔｈｔｈｅａｄｄｉｔｉｏｎｏｆｒａｂｂｉｔａｎｔｉｈｕｍａｎＦＡＮＣＤ２ａｎｔｉｂ