液相色谱／质谱联用法分析不同年龄鼠皮肤中i型、iii型胶原蛋白相对含量.pdfVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００７，２７（４）：７１～７６ 液相色谱／质谱联用法分析不同年龄鼠 皮肤中Ｉ型、ＩＩＩ型胶原蛋白相对含量 １ ２ ２ ２ １ ２ 崔　琳 　张贵锋 　刘　涛 　闭静秀 　马润宇 　苏志国 （１北京化工大学生命科学与技术学院　北京　１０００２９　２中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室　北京　１０００８０） 摘要　哺乳动物皮肤中真皮内的胶原蛋白含量约占７０％，主要是 Ｉ型、ＩＩＩ型和少量Ｖ型胶原蛋 白。利用稀酸溶解和酶法提取了大鼠皮肤中的总胶原蛋白，将胶原蛋白粗提品在６０℃变性后用 胰蛋白酶进行降解，液相色谱／质谱联用法分析两种胶原蛋白的特征多肽，并研究不同生长期大 鼠皮肤中Ｉ型和ＩＩＩ型胶原蛋白相对含量。结果表明，大鼠皮肤中的ＩＩＩ型胶原蛋白的相对含量随 生长期延长逐渐降低，而Ｉ型胶原蛋白的相对含量逐渐升高，８周后两种胶原蛋白的比例趋于稳 定。表明使用高效液相色谱／质谱联用法分析组织中的胶原蛋白类型及其动态变化具有可行性， 为更好的临床应用提供实验基础。 关键词　胶原蛋白　含量　酶解　高效液相色谱　质谱 中图分类号　Ｑ８１９ 　　胶原蛋白（ｃｏｌｌａｇｅｎ）又称胶原，是动物细胞外基质 较大的误差。仇灏等［６］利用凝胶电泳法研究了 射线 γ 的重要组成部分，以胶原纤维的形式存在于几乎所有 外照射对皮肤等组织中胶原代谢指标的影响，但利用 组织内，约占哺乳动物总蛋白的１／３。胶原蛋白与多糖 该方法分离分子量相近的胶原蛋白存在分辨率低等局 以及其它蛋白质等相互作用构成的复杂结构对细胞和 限性。胶原蛋白经溴化氰（ＣＮＢｒ）处理后可形成不同分 组织的生长、代谢、分化以及形态结构等均有重要影 子量的多肽（ＣＮＢｒ肽），根据 ＣＮＢｒ肽的种类可识别胶 ［１］ ［７］ 响 。近年来，大量研究表明许多皮肤疾病（如银屑病 原蛋白的类型 ，ＣＮＢｒ肽分离方法包括色谱法、凝胶 和皮肤恶性肿瘤等）与胶原蛋白的表达、分布、代谢和 电泳法和毛细管电泳法等，但由于许多ＣＮＢｒ肽的分子 ［２］ 动态变化异常有关 。因此，研究皮肤中不同种类胶 量较为接近、亲水性较强，导致不同胶原蛋白的特征性 原蛋白的相对含量及其动态变化不仅有利于疾病的早 ［８～１０］ ［１１］ ＣＮＢｒ肽难以完全分离 。孙爱梅等 的研究结 期诊断，而且有助于认识致病机理等。 果表明胶原蛋白酶解产物中存在许多特征多肽，利用 　　胶原蛋白由三条自身为左手螺旋的多肽链（ 链） α 质谱法通过特征多肽分析可进行胶原蛋白的类型识 以平行右手螺旋形式构成，根据 链的种类可分为多 α 别。质谱分析具有灵敏度高、所需样品量少和定量准 ［３］ 种类型 。许多胶原蛋白常温下难溶于水溶液且不易 确等优点，可以对色谱峰中的多种多肽同时鉴别。因 ［４］ 被胰蛋白酶等降解 ，因此直接分析其种类和含量存 此，本研究拟在