dna粗提取与鉴定 - 于都中学.pptVIP

万晓军生物工作室 E-mail:1223wxj@163.com QQ:719455374 课题1：DNA粗提取与鉴定 两种材料的DNA粗提取与鉴定过程 以鸡血为材料 以花菜为材料 DNA的鉴定 * ■高中生物课件（人教课标版） 万晓军生物工作室（安义中学） Tel E-mail:1223wxj@163.com QQ:719455374 校址：江西省南昌市安义县龙津镇前进路320号 邮编：330500 学习目标 知识目标 1、通过尝试对植物或动物组织中的DNA进行粗提取，了解DNA的物理化学性质。 2、理解DNA粗提取与鉴定的原理。 能力目标 掌握DNA粗提取及鉴定方法，能利用DNA的性质进行实验设计和操作。 态度观念目标 通过对DNA的粗提取的实验过程的设计及操作，锻炼科学的思维方法，培养实事求是的科学态度。 1、鸡血细胞做实验材料，一是因为鸡血细胞核的DNA含量丰富，材料易得；二是鸡血细胞极易吸水胀破。 2、DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同， 3、嫩肉粉的主要成分是木瓜蛋白酶，其作用是分解蛋白质，使提取出的DNA纯度较高 4、预冷的乙醇溶液具有以下优点：一是抑制核酸水解酶活性，防止DNA降解，二是降低分子运动，易于形成沉淀析出，三是低温有利于增加DNA分子柔韧性，减少断裂； 5、洗涤剂等去污剂可以溶解细胞的细胞壁，破坏细胞膜，同时也能使蛋白质变性； 6、在60—75度条件下加温处理，蛋白质变性，而DNA结构不会受到破坏，提取纯度较高的DNA 7、甲基绿能使DNA染成绿色 根据以上原理可设计提取和纯化DNA的方案： 方案一：30mL含DNA的滤液＋2mol/L NaCl→同方向搅拌，DNA溶解→加入蒸馏水→DNA析出→过滤得到过滤物→放到2mol/LNaCl溶液中溶解→DNA-NaCl溶解液 方案二：30mL滤液＋嫩肉粉（木瓜蛋白酶）→静置10～15分钟→DNA滤液 方案三：30mL滤液→60～75℃恒温保温10~15分钟→过滤获得DNA滤液 ①释放组织细胞中的DNA， ②粗提取DNA， ③将粗提取的DNA进一步纯化， ④鉴定提取物是DNA １.取新鲜植物组织（菜花）放置于冰箱中冷却1~2天 ２.取30克植物组织,切碎,置于研体中,倒入适量洗洁精,加入适量的NaCl,充分研磨10分钟 ３.过滤研磨液，取上清夜置于冰箱中冷却几分钟 ４.取1倍体积的上清液，加入2倍体积的95%的冷酒精当中，用玻棒轻轻搅拌，沉淀3~5分钟后可见白色絮状DNA缠绕于玻棒末端。 ５.DNA的提纯同鸡血细胞为实验材料的实验操作步骤6、7，具体数据有一定的差异。 ６.鉴定 １. 0.1g/ml的柠檬酸钠溶液,按1:2的比例与新鲜鸡血混合搅拌均匀。 ２.将血液置于冰箱中24小时,弃上部澄清液 ３.取烧杯中的血细胞液约5~10ml加入到100ml烧杯中，向烧杯中加入20ml蒸馏水，用玻棒沿一个方向快速搅拌5分钟，加速血细胞在低渗溶液中的破裂 ４.将2mol/L的氯化钠溶液50ml缓缓倒入烧杯中，用玻棒沿一个方向搅拌，使DNA溶解于氯化钠溶液中，滤除杂质，获得粘稠状的鸡血细胞DNA提取液 ５.将鸡血细胞DNA提取液置于较大的烧杯中，沿烧杯内壁缓缓倒入蒸馏水，并不断搅拌，直到粘稠状DNA不再析出为止。用玻棒搅拌，使析出的DNA缠绕于玻棒末端。 ６.将析出的DNA再溶解于2mol/L的氯化钠溶液中。 ７.在DNA的氯化钠溶液中倒入95%的酒精50 ml（冷却过的酒精效果较好），使DNA再次析出，用玻棒搅拌，使DNA再次缠绕于玻棒末端。 ８.DNA的鉴定：取两支试管，各加入2ml0.015氯化钠溶液，将DNA溶解于其中一支试管中，另一支做为对照组。然后，在两支试管内加等量的二苯胺试剂，水浴加热10min左右，冷却，观察实验现象。 植物组织 鸡血细胞 鸡血细胞液中DNA的粗提取实验流程图 2mol/L 鸡血细胞液中DNA的粗提取实验流程图 5、过滤→取纱布上的滤物 纱布过滤 6、再次溶解DNA 2mol/LNaCl溶液 取滤物 鸡血细胞液中DNA的粗提取实验流程图 7、加冷酒精使DNA析出（纯化） 冷酒精 鸡血细胞液中DNA的粗提取实验流程图 DNA的粗提取与鉴定 实验原理 DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同 DNA与其他细胞成分在酒精中溶解度不同 DNA和蛋白质对酶、高温和洗涤剂耐受性不同 DNA与二苯胺呈现蓝色反应 DNA粗提取 选择适宜材料 破碎细胞 DNA的溶解和析出 DNA的纯化 鉴定DNA 与二苯胺混合，沸水浴，呈现蓝色反应 总结： 1. 下列关于DNA粗提取与鉴定的说法正确的是 A．氯化钠的浓度越低，对DNA的溶解度越大 B．人血也可代替鸡血进行实验