dvl2鄄dix 结构域的site芋相关突变体结晶及其与ccd1鄄dix 的共结晶.pdfVIP

生物化学与生物物理进展 Progress in Biochemistry and Biop hys ics 2012, 39(7): 647~654 Dvl2 DIX 构域的Site 芋相关突变体结晶 及其与Ccd1 DIX 的共结晶* 1, ２) 3) 3) 1, 3)** 但琼洁 刘奕彤 吴嘉炜 王志新 1) 2) ( 中国科学院生物物理研究所，北京100101 ； 中国科学院研究生院，北京 100049 ； 3) 清华大学生命科学学院结构生物中心，北京100084) 摘要 Dvl (Dishevelled) 是Wnt 信号通路传递的核心分子，无论内源的还是过表达的Dvl 在细胞体内都能因自聚而形成 puncta 研究已报道，Dvl 主要通过其DIX 结构域上的三个作用区域来介导自聚：Site 、Site 和Site ，其 Site 和Site 域 芋 域 还参与了Dvl-DIX 与Ccd 1-DIX 的异聚 为了进一步得到Dvl2-DIX 上Site 和Site 域的直接三维结构，本研究设计了一系列 的Site 芋突变体 通过体内和体外实验进一步证实了这些突变氨基酸确实参与了Dvl2-DIX 的自聚，然后对这些Site 芋突变体 蛋白成功地进行了纯化和结晶，最终得到3.1魡 的Dvl2-DIX(G65A) 晶体数据 分析表明该晶体存在片层位移现象，需对数据 进行一定修正后才能进行后续的结构分析 体外实验又证实了这些突变氨基酸不影响Dvl2-DIX 与Ccd 1-DIX 的异聚，为了 进一步研究Dvl2-DIX 与Ccd1-DIX 相互作用，我们对这些Site 芋突变体蛋白与Ccd1-DIX 进行共结晶 最终获得Dvl2-DIX (G65A)与Ccd1-DIX 复合物的初晶，利于进一步的晶体优化及数据收集 关键词 Wnt 信号通路，Dishevelled，DIX 结构域，结晶 学科分类号 Q71 DOI: 10.3724/SP.J.1206.2012.002 16 Wnt 信号通路调控着生物体的生长、发育、疾 域即是Site 2011 年，我们组解得Ccd1-DIX 和 病、衰老与死亡等生命过程，能影响细胞形态与功 突变体Dvl1-DIX (Y 17D)( 在Dvl2 中是Y27D) 的晶 [11] 能的分化和维持、免疫、应激、细胞癌变与细胞凋 体结构 通过二者的结构分析和序列比对推得在 亡等[1-4] Dvl 蛋白是调控Wnt 信号通路的核心分 Dvl-DIX 上还存在着一个重要的作用区域Site 域参 子 无论内源的还是过表达的Dvl 在细胞体内都能 与自聚 但目前突变体 Dvl 1-DIX (Y 17D) 是个单 形成puncta [5-9] 失去形成puncta 能力的Dvl 突变 体 它的晶体结构显示，在一个晶胞内8 个分子形 体(例 Dvl2-Y27D)不再能激活Wnt 信号通路 研 成 2 条长的螺旋纤维结构 但与 Axin-DIX 和 究证明Dvl 的puncta 是在动态聚合的情况下形成 Ccd1-DIX 的螺旋比较起来，Dvl1-DIX (Y 17D) 的螺 [10] 的 因此 种动态聚合与Dvl 激活Wnt/茁-catenin 旋更为松散 因此它的晶体堆积很可能与野生型不 通路的能力有着紧密关系 而Dvl 的聚合是通过它