转座子mini-tn10 介导的运动突变对溶藻弧菌毒力的影响 - 水产学报.pdfVIP

第 36 卷第 7 期 水 产 学 报 Vol.36, No.7 2012 年 7 月 JOURNAL OF FISHERIES OF CHINA July, 2012 文章编号: 1000-0615(2012)07-1126-07 DOI:10.3724/SP.J.1231.2012.27980 转座子 mini-Tn10 介导的运动突变对溶藻弧菌毒力的影响 1 1 1* 2 1 1 覃映雪 , 徐晓津 , 鄢庆枇 , 苏永全 , 刘力铭 , 李学刚 (1. 集美大学水产学院, 农业部东海海水健康养殖重点实验室, 福建 厦门 361021; 2. 厦门大学海洋与地球学院, 福建 厦门 361005) 摘要: 采用转座子 mini-Tn10/Km 构建了致病性溶藻弧菌的突变库, 采用半固体双层平板初 筛到73 株运动缺陷突变株, 初筛的突变株纯化及重复筛选后获得运动性缺陷表型稳定的突 变株ND-01MM, Southern 鉴定确定其为单位点插入。野生型菌株ND-01 和运动缺陷突变株 ND-01MM 对致病性溶藻弧菌的天然宿主大黄鱼粘液的趋化、粘附以及在大黄鱼吞噬细胞内 存活能力等生理功能的比较研究发现, 溶藻弧菌运动缺陷后趋化及粘附能力均极显著下降 (P0.01), 但在吞噬细胞内的存活能力则与野生型菌株差异不显著(P0.05) 。采用腹腔注射和 浸泡两种方式感染大黄鱼, 结果发现运动缺陷对浸泡感染的影响较为明显, 但对腹腔注射 的感染方式影响不大。 关键词: 溶藻弧菌; 运动缺陷; 转座子; 毒力 中图分类号: Q 786; S 917 文献标志码: A 溶藻弧菌 ( Vibrio alginolyticus)是一种广泛 因鞭毛缺失导致运动性丧失的突变株和鞭毛部分 分布于世界各地海水及河口的革兰氏阴性嗜盐 缺失且保留部分运动性的突变株 , 结果缺失了运 菌 [1-2] 。该菌寄主范围广，不仅能够感染多种海 动性的突变株不能在小鼠肠道内定殖,具有部分运 洋脊椎动物和无脊椎动物[3-5] ，并给世界各国海水 动性的菌株保留一部分定殖能力。对创伤弧菌 养殖业造成巨大的经济损失 , 还可感染人类引发 ( Vibrio vulnificus) 的研究也发现, 运动缺失后细菌 皮肤溃疡等疾病[6] 。现有研究发现, 溶藻弧菌的毒 对细胞的粘附及形成生物被膜的能力降低 , 对小 力因子涉及粘附、胞外产物、铁载体及Ⅲ型分泌系 鼠的毒性也明显减弱[14] 。Ormonde 等[9]发现鳗弧菌 统等[3-4], 但溶藻弧菌运动性与其致病性的关系很 （Vibrio anguillarum ）运动缺失突变株对鱼类细胞 少报道。 的入侵能力显著下降。 大量研究表明, 细菌的运动性和致病性密切 本实验采用转座子 mini-Tn10/Km 构建溶藻弧 相关[7-9] 。运动功能在细菌获取营养、逃避毒性物 菌突变库 , 并从突变库中筛选和鉴定运动缺陷表 质、在宿主中寻找适宜位点粘附定殖、入侵宿主以 型稳定的菌株, 研究野生型菌株与运动缺陷突变 及向周围环境播散的过程中起着至关重要的作用 , 株在趋化、粘附、吞噬细胞内存活等方面的生物学 很多情况下运动是病