丙肝病毒ns3- 4a 基因的重组杆状病毒穿梭载体的构建 - 中国热带医学.pdfVIP

DOI:10.13604/j.cnki.46-1064/r.2011.02.001 中国热带医学 2011 年第 11 卷第 2 期 CHINA TROPICAL MEDICINE Vol . 11 No .2 February 2011 131 ［论 著］ 丙肝病毒 NS3- 4A 基 因的重组杆状病毒穿梭载体的构建 姚相杰，刘涛，何雅青，杨洪，阳帆，张海龙，冼慧霞 摘要 ：目的 通过克隆丙肝病毒非结构蛋白 NS3-4A 基因，构建表达 HCV-NS3-4A 基因的重组杆状病毒穿梭载体。 方法 设计合成 HCV NS3-4A 基因全长的特异性引物 ，应用逆转录-多聚酶链反应（RT-PCR ）扩增非结构蛋白区NS3-4A 基因片段，经限制性内切酶 EcoR I 和 Hind III 双酶切后克隆到 pFastbacDual 上，并转化到大肠杆菌 DH5α 中，最后经 PCR 和双酶切鉴定转化菌落。 结果 扩增得到的基因片段长度为 2.2kb ，该片段成功克隆在杆状病毒穿梭载体 pFastBac Dual 上，经测序证实为 HCV NS3-4A 基因，这表明 HCV-NS3A 基因重组杆状病毒穿梭载体构建成功。 结论 成功构建 了表达 HCV NS3-4A 基因的杆状病毒穿梭载体，这将为下一步 HCV 杆状病毒载体疫苗的制备打下基础。 关键词 ：丙肝 ；病毒 ；杆状病毒 ；载体 ；构建 中图分类号 ：R512.63 文献标识码 ：A 文章编号 ：1009-9727（2011 ）2-131-02 Construction and identification of recombinant baculovirus transfer vector for expressing NS3-4A protein of HCV. YAO Xiang -jie ，LIU Tao ，HE Ya -qing ，et al. （Shenzhen Municipal Center for Disease Control and Prevention. Shenzhen 518020 ，Guangdong ，P. R. China ） Abstract ：Aim To amplify HCV NS3-4A gene and construct the recombinant baculovirus vector containing NS3- 4A of HCV. Methods HCV RNA was extracted from HCV patients serum and NS3-4A gene was amplified by RT-PCR with the designed primer. Then the NS3 -4A fragment was digested with EcoR I and HindIII and ligased with the pFastbacDual vector of baculovirus. After transformation ，the recombinant plasmid was identified by PCR and double endnuclease digestion. Results A 2.2Kb fragment was obtained from amplification ，the sequence was confirmed to be HCV NS3-4A gene by sequence analysis. PC