转基因克隆技术在羊上应用的研究进展 - 中国畜牧业协会.pdfVIP

转基因克隆技术在羊上应用的研究进展 1 2 3 张冰 王潇 张居农 （1.新疆医科大学基医学院 乌鲁木齐 830053 2.解放军第474 医院 乌鲁木齐 830000 3.石河子大学动物科技学院 石河子 832003 ） 摘要：转基因克隆技术是将转基因技术与动物克隆技术有机的结合，其研究意义和实用价值超过了两 种技术本身。本文从转基因动物与克隆技术、转基因山羊的制作方法与研究进展、转基因克隆山羊的研究 进展和问题与展望等方面综述了转基因与克隆技术在山羊的应用研究技术与进展。 关键词：转基因；克隆； 山羊 自Palmiter 等(1982)将大鼠生长激素基因导人小鼠受精卵获得超级巨鼠以来，世界各国 科学家对转基因技术应用于动物生产的研究产生了极大的兴趣，并相继在兔、羊、猪、牛、 鸡、鱼等动物上获得转基因成功，其应用已广泛渗透于分子生物学、发育生物学、免疫学、 制药及畜牧育种等各个研究领域中，在提高，生长速度、生产性能，改善产品品质、抗病育 种、基因治疗等方面取得了可喜的进展，显示出诱人的应用前景。 转基因克隆技术是将转基因技术与动物克隆技术有机结合，其研 究意义和实用价值超过了两种技术本身。本文综述了转基因与克隆技术在羊的应用研究 技术与进展。 1 转基因动物与克隆技术 1.1 转基因动物 转基因动物是指以实验方法导人的外源基因在染色体基因组内稳定整合并能传递给后 代的一类动物。 1976 年，Jaenisch 首次利用反转录病毒感染胚胎的方法获得了转基因小鼠，1980 年 Gordon 等人采用受精卵原核显微注射的方法，将外源基因导人小鼠受精卵，获得了转基因 小鼠。自Palmitered 将大鼠生长激素(GH)基因导人小鼠受精卵中获得转基因“超级鼠”后， 转基因动物已成为当今生命科学发展中的热门领域。此后，Hamme 等(1985)将鼠的金属硫 蛋白基因和人生长激素基因转入绵羊中，成功获得世界上第一只用显微注射法制备转基因羊。 1.2 动物克隆 动物克隆，即动物的无性繁殖，是将供体细胞核移人去核的卵母细胞中，使后者不经精 子穿透等有性过程即可被激活，分裂并发育成个体，使得核供体的基因得到完全复制。 目前，动物克隆技术的核心是核移植。将胚胎或体细胞的细胞核采用显微外科手术 的方法移人去核的卵母细胞中，构建重组胚。通过体内或体外培养、胚胎移植，产生与 供体细胞基因型相同后代的技术过程。它以转基因细胞为核供体，采用体细胞核移植技 术产生转基因克隆动物，实现种质创新。 1.3 转基因克隆动物技术优势 1.3.1 生产效率高 据不完全统计，从 1989 年～1997 年用显微注射技术生产转基因动物平均51.4 个动物得 到一个转基因后代，而得到一个转基因克隆后代只需20.8 个母体。 1.3.2 周期短，成本低 通过核移植克隆，可以迅速产生大量同质的转基因克隆动物。转基因克隆技术，在理论 上只需一代时间，就可以产生一个完整的转基因克隆动物系，从而节约了时间和成本。由于 植入代孕的母羊全是转基因胚胎，因而提高了生产效率，降低费用。 1.3.3 控制后代性别 在以生物制药为目的的转基因克隆动物生产中，性别是至关重要的，例如需要用雌性生 产乳汁，若第一代为雄性，则要等到女儿成熟后才能生产，至少两代。由于选择体细胞作为 供体，可以预先决定性别，还可以用PCR 对性别检测，只挑选性别合适的细胞作为核供体。 2 转基因羊的制作方法与研究进展 转基因羊的制备方法主要有以下几种：原核显微注射法；体细胞核移植法；胚胎干细胞 介导法；原始生殖细胞介导法；逆转录病毒介导法；精子载体法和；核移植介导法等。 2.1 原核显微注射法 原核显微注射法是目前应用较广泛、效果较稳定的转基因山羊制作方法。原核显微注射 法是直接把DNA 注射到受精卵的原核中。 用其制备转基因山羊的主要程序包括：制备有良好表达活性的目的基因、用显微注射装 置将目的基因导人羊的受精卵雄性原核、将含有外源基因的受精卵移植入受体母羊的输卵管、 经过妊娠和分娩、获得后代、再用分子杂交或PCR 法筛选出整合有外源基因的幼仔、最终 得到转基因个体。 原核显微注射法制备转基因制