四种神经肽的反相高效液相色谱法分离.pdfVIP

1997 年　　　　　　　　　　　　分析试验室　　　　　　　　　　第 16 卷　第 6 期 四种神经肽的反相高效液相色谱法分离 刘雪松　田津斌　方　明　许　伟　韩济生 (北京医科大学神经科学研究中心, 北京 100083) 摘　要　以反相高效液相色谱法( ) 分离甲硫脑啡肽( ) 、 R P H PL C M EK 亮脑啡肽( ) 、强啡肽 117 ( 117) 、胆囊收缩素( 8 ) 。色 L eu EN K A D ynA CCK s 谱柱为 (2 1 ×150 ) ; 流动相: 乙腈水三氟乙酸 ZORBA XC 18 mm ID mm (T FA ) , 梯度洗脱, 紫外检测器检测: UV 215nm 。上述条件下, 四种神经 肽在微克水平得到较好分离。 关键词　反相高效液相色谱法; 甲硫脑啡肽; 亮脑啡肽; 强啡肽A 117; 胆 囊收缩素 　　在 H PL C 中, 分离纯化肽最常用的是 R P 到 45% 。紫外检测器检测波长为 215nm , 检测 , 回收率较高、分离效果好[ 1～ 2 ] , 但某些场 灵敏度 016 , 输出信号由 3 数据 H PL C AU FS CR A 合不太适用, 例如用放射免疫方法对神经肽进 处理机处理。 行定量分析时, 如果用缓冲盐作为流动相, 放免 3　标准液配制 分析前要对样品进行脱盐预处理, 导致样品损 、 、 117、 8 分别 M EK L eu EN K D ynA CCK s 失。本方法对四种与镇痛及抗镇痛有关的神经 溶于流动相 液中, 浓度均为 1 , 进样体 A g l 肽进行了分离并获得了比较满意的效果。 积 2L 。 1　仪器与试剂 4　样品制备 岛津 6 ( 1) 型高效液相色谱仪、 L C A U 大鼠脊髓灌流液、脑脊液分别经 Sep pak 7125 手控进样器、岛津 6 紫外检测器 SPD AV 柱进行脱盐预处理, 冻干复溶后, 各溶于流动相 和 3 色谱数据处理机。 、 、 C R A M EK L eu EN K A 液 100L 中, 进样体积 80L 。 ( ) ( 117、 8 , 公司 ; 乙腈 色谱 D ynA CCK s Sigm a 5　结果和讨论 纯; 中科院上海脑研所上海脑海生物科技公 51　反离子对试剂的选择　在神经肽的反相