超耐热酸性α-淀粉酶基因的克隆及其在酵母细胞中的表达molecular .pdf

22 卷 2 期 生 　物 　工 　程 　学 　报 Vol . 22 　No . 2 2006 年 3 月 Chinese J ournal of B iotechnology March 　2006 α 超耐热酸性 - 淀粉酶基因的克隆及其在酵母细胞中的表达 　 Molecular Cloning and Expression of Extremely Thermo stable and Acid- stable Amylase Gene in Pichia pastoris 1 2 2 1 1 郭建强 , 李运敏 , 岳丽丽 , 邱阳生 , 矫庆华 1 2 2 1 1 GUO Jian-Qiang , L I Yun-Min , YUE Li-Li , QIU Yang- Sheng and J IAO Qing- Hua 1 中国科学院微生物研究所 , 北京 　100080 2 VA Medical Center 111C5 , Department of Medicine University of California at San Francisco 4150 Clement Street , San Francisco , CA 94121 , USA 1 Institute of Microbiology , Chinese Academy of Sciences , Beij ing 100080 , China 2 VA Medical Center 111 C5 , Dep artment of Medicine University of Calfi ornia at S an Francisco 4150 Clement Street , S an Francisco , CA 94121 , USA α 摘 　要 　用 PCR 方法扩增来源于极端嗜热厌氧古菌 Py rococcus f uriosus 中的超耐热酸性 - 淀粉酶的结构基因 , 将该结构基因 α α 引入载体 p PIC9K 中 , 将重组质粒 p PIC9KAmy 转化大肠杆菌 DH5 细胞 , 测序结果表明 , 克隆到的 - 淀粉酶结构基因为 α 1305bp , 其编码的成熟肽为 435 个氨基酸 。将正确构建的重组质粒转化毕赤酵母 GS115 细胞 , 得到酵母工程菌株 。在酵母 - α Factor 及 A OX 1 基因启动子和终止信号的调控下 , 超耐热酸性 - 淀粉酶在甲醇酵母中大量表达并分泌到