高效液相色谱技术(hplc) 影响因素的选择.pdf

第 26 卷增刊 分析试验室 Vol . 26 . Suppl . 　　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　　 2007 年 12 月 Chinese Journal of Analysis Laboratory 2007 - 12 ( ) 高效液相色谱技术 HPLC 影响因素的选择 赵轶男 (大连民族学院 生命科学学院 , 大连 116600) 摘 　要 : 阐述了高效液相色谱技术的应用 , 介绍了高效液相色谱技术影响因素 的选择 , 如流动相 、固定相 、柱温 、监测器等等 。 关键词 : 高效液相色谱 ; 影响因素 ; 固定相 ; 流动相 ; 检测器 1 　高效液相色谱技术应用 固体和硬胶两类 。刚性固体 以二氧化硅为基质 , ( ) 8 9 高效液相色谱法 HPLC , 是具有分离分析效 可承受 7 . 0 ×10 Pa ～1. 0 ×10 Pa 的高压 , 可制成 能高 、速度快 、检测灵敏度高等特点的分离技术 。 直径 、形状 、孔隙度不同的颗粒 。如果在二氧化硅 以其不受试样挥发性和相对分子质量的限制 , 可 表面键合各种官能团 , 可扩大应用范围 , 它是 目 用于分离分析高沸点、相对分子质量大 、热稳定 前最广泛使用的一种固定相 。硬胶主要用于离子 性差的有机化合物 , 还可用于各种离子的分离分 交换和尺寸排阻色谱中 , 它由聚苯乙烯与二乙烯 析 ; HPLC 还可利用组份分子尺寸大小的差别 、离 苯基交联而成 。可承受压力上限为 3 . 5 ×108 Pa 。 子交换能力的差别以及生物分子间亲和力的差别 固定相按孔隙深度分类 , 可分为表面多孔型和全 进行分离 ; 可用多种溶剂作为流动相 , 对于性质 多孔型固定相 。表面多孔型固定相的多孔层厚度 和结构类似的物质 , 分离的可能性比气相色谱法 小 、孔浅 , 相对死体积小 , 出峰迅速 、柱效亦高 ; 更大 。因此高效液相色谱的应用领域不断扩大和 颗粒较大 , 渗透性好 , 装柱容易 , 梯度淋洗时能迅 深入 , 目前已成为化学化工 、商品检验 、食品卫 速达到平衡 , 适合进行常规分析 , 但 由于多孔层 生 、环境保护 、生命科学和药品分析等诸多领域 厚度薄 , 最大允许量受到限制 。全多孔型固定相 中重要的分离分析技术 。 由直径为 10 nm 的硅胶微粒凝聚而成 。由于颗粒 ( μ ) 目前高效液相色谱仪与结构仪器的联用技术 很细 5～10 m , 孔仍然较浅 , 传质速率快 , 易实 是一个重要的分析检测手段 。液相色谱质谱联用 现高效 、高速 。适合复杂混合物分离及痕量分析 。 技术 , 使得液相色谱的高分析能力和质谱高鉴定 2 . 2 　流动相 能力相结合 , 对复杂样品体系 , 特别是生物医学 在液相色谱中 , 当固定相选定时 , 流动相的 领域的研究提供了更进一步的有效方法[ 1] ; HPLC 种类 、配比能显著地影响分离效果 , 因此