AGEsRAE轴调控wntβ-catenin促进人主动脉平滑肌细胞钙化.pdfVIP

目 录 1 钙化…···…··…………………………………………………·1 1．1中文摘要………………………………………………………1 1．2英文摘要……………．．．………………………………………3 1．3前言……………………………………………………………6 1．4材料与方法……………………………………………………9 6 00 00…………………19 1．5结果………………………·……·……·0 1．6讨论…·····……··………………·…··…·····………·······…··32 O0O000mQOO0……………………···37 i．7结{仑·………………………··O 1．8参考文献………………………………………………………38 0 0Q0 0……………………………………41 1．9英汉缩略词对照表…0 2 致谢……………………………………………………………43 3 机制的研究进展(综述)………………………………………45 摘 要 目的：探讨RAGE是否具有促进动脉平滑肌细胞钙化的功能，明确RAGE ORF 性细胞转化的潜在关系。方法：(1)通过慢病毒颗粒载体介导的RAGE 感染细胞，以建立稳定高表达RAGE蛋白的细胞模型。绿荧光蛋白表达、 流式细胞技术及免疫印迹法检测验证细胞稳定高表达RAGE蛋白。(2)将 正常条件下培养的人主动脉平滑肌细胞作为空白对照组，分为空白对照组、 未转染慢病毒组，空载体慢病毒转染组、携带RAGE慢病毒转染组，对未 转染慢病毒组，空载体慢病毒转染组、携带RAGE慢病毒转染组分别以 AGE共同作用下对各组人主动 10mmol／L[3．甘油磷酸、丙酮酸和20mmg／L 脉平滑肌细胞进行干预培养，倒置相差显微镜下观察各组细胞生长情况及 钙化情况，第10天时对各组细胞进行冯库萨染色和钙定量检测。(3)将正 常条件下培养的人主动脉平滑肌细胞作为空白对照组，分为空白对照组、 AGE共同作用下对各组人主动脉平滑肌细胞进行干预 丙酮酸和20mmg／L 培养，利用western blotting检测干预前和干预后各组细胞与成骨相关蛋白 滑肌细胞为空白对照组，将实验分为空白对照组、RAGE高表达细胞干预 siRNA 培养组、对照siRNA组以及13-cateninsiRNA抑制组，对经13-catenin 1 处理过的细胞组进行干预培养。利用蛋白印迹技术对各组细胞OPG、cabfal 的表达进行检测。结果：(1)绿荧光蛋白表达、流式细胞技术及免疫印迹 法检测结果证实RAGE高表达人主动脉平滑肌细胞模型成功建立。(2)与 空白对照组、未转染慢病毒组，空载体慢病毒转染组相比，在钙化+AGEs 干预培养下，携带RAGE慢病毒转染组的钙化程度增强。(3)空白对照组、 空载体慢病毒转染组、RAGE高表达细胞组三组细胞在进行干预培养后， 高表达组细胞中上述因子的表达远强于其他各组。(4)与RAGE高表达细 胞组和对照siRNA细胞组相比，13-catenin Wntl3．catenin途径，启动其下游因子，而促进血管平滑肌细胞成骨转化， siRNA所抑制。 增加，可被13-catenin 膜钙化；血管平滑肌细胞 2 mediatewnt／beta·cateninto