Cbp分子在CD59 GPI介导的T细胞抑制信号转导中的作用探究.pdfVIP

中文摘要 中文摘要 目的研究GPI锚固蛋白CD59与Cbp在细胞上的定位及在T细胞信号转导通路中的相互作用，以探 讨CD59向T细胞内传递信号的相关机制。 方法应用细胞免疫荧光技术，通过激光共聚焦荧光显微镜系统对CD59、Cbp的定位进行了分析。 利用RNA干扰技术，设计针对Cbp基因的寡核苷酸序列，克隆至线性化的pSUPER载体中构建 表达，并行RT—PCR矛[1western 白的表达。CD59mAb交联刺激细胞后，western 检测细胞增殖；ELISA检测细胞上清中自介素2(IL一2)的水平。 结果激光共聚焦结果显示：细胞静止时，Cbp分子点状聚集于膜上，CD59分子广泛分布；随着 DNA PCR、限制性内切酶双酶切分析和DNA测序鉴定正确。各转染组可表达绿色荧光蛋白，转染 行后续检测结果：与未转染组比较，在基因与蛋白水平，干扰组Cbp表达减少，而高表达组和突 变组Cbp表达增加。CD59mAb交联刺激细胞后，与朱转染组比较，干扰组和突变组细胞增殖快，IL一2 分泌增多，Csk、p-ZAP一70,币llp—Fyn增多，突变组变化更明显；高表达组细胞则与之相反。 结论CD59可借助棕榈酰基团使Cbp分子磷酸化，向细胞内传递抑制信号，引起细胞内相关分子 GPI胞内信号转导机 的一系列变化，为探讨CD59与cbp在T细胞信号转导通路中相互作用及CD59 制奠定基础。 硕士研究生姬静 (免疫学) 指导教师 高美华 教授 酶 Abstract To theinteractionsbetweenCD59and inJurkatcell objecfivestudy Cbp signal transductionand themechanismsofCD59totheTcell transduction． explore signal ofCD59and was theconfocallaser MethodsThe10cation Cbp analyzedusing withtheimmunofluorescence ofshRNAwere scanningmicroscope technique．TwOpairs andclonedintothelinearized vector．Thenthe designed．synthesized pSUPER recombinantvectors wereidentified．TheJurkatcellwastransfectedwith Cbp．pSUPER the GFP recombinant electrictransfectionmethods，the of plasmidsusing expressiongene wasdetectedfluorescence andthe of wasconfirmed by microscopyexpressionCbpgene RT．PCRandwesternblot．The andmutationalwere by pSUPER．siC