TWIST抑制雌激素受体α表达的表观遗传分子机制和乳腺癌临床意义.pdf

目 录 1 TWIST抑制雌激素受体0【表达的表观遗传分子机制及乳腺癌 临床意义………………………………………………………1 1．1 中文摘要………………………………………………………1 1．2 英文摘要………………………………………………………4 1．4 材料与方法……………………………………………………12 1．5 结果……………………………………………………………26 1．6 讨{仑……………………………………………………………41 1．7 结{仑……………………………………………………………45 1．8 参考文献………………………………………………………46 1．9 英汉缩略词对照表…………………………………．』………．51 2 致谢……………………………………………………………54 3 55 Twist促进恶性肿瘤转移关系的研究进展(综述)………… 附1彩图……………………………………………………………70 附2研究生期间发表论文…………………………………………72 TWIST抑制雌激素受体仅表达的表观遗传分子机和及 乳腺癌临床意义 摘 要 目的：探讨与肿瘤转移相关的重要转录因子TWIST与雌激素受体 0【(ER0【)之间分子水平和功能上的调控关系及其乳腺癌临床的意义。方 ERot的表达关系，通过RT-PCR和Westernblot方法，检测了5个不 制ESRl基因转录的功能，本课题完成了如下实验：1、完成了荧光 素报告基因分析技术；2、为了检测外源性TWIST的表达是否抑制内 技术和细胞转染过表达技术，使TWIST基因沉默和过表达进行分析； 最后，为了检测人类乳腺癌患者中TWIST与ERa表达的关系及可能 的临床意义，实验中收集了28例乳腺浸润性导管癌患者的肿瘤组织， 系及其阴性对照的HEK293细胞系；应用该细胞系，进行ChIP测序 与TWIST结合的NuRD复合物重要组分Mi．2， 315、 TWIST结合区域；在高侵袭性的ERa表达阴性的SUMl MDA．MB．43 blot 5和MDA—MB一231细胞系中，用RT-PCR和Western 检测出高水平的TWISTmRNA和蛋白质表达，而在低侵袭性且高表 蛋白质水平。在荧光素报告基因分析实验中，将TWIST结合的关键 表达的TWIST显著地抑制了这个报告基因的活性，而对照组将 在TWIST 基因上的TWIST／NuRD的相关区域具有转录抑制功能； 的RNA干扰和细胞转染过表达实验中，分析结果揭示了在 ’ 蛋白质低水平表达或者无法检测到而ERa的mRNA和蛋白质呈现高 质水平都降低。这些结果显示在86％的侵袭性乳腺癌组织中，TWIST 的表达与ERa表达呈负相关。结论：揭示了TWIST表观遗传学抑制 的蛋白表达呈负相关； ERa在乳腺癌细胞中的表达和抑制是～个可 逆的过程。在这些ERa表达被抑制的乳腺癌细胞中我们使用HDAC 临床上治疗乳腺癌患者时，可能恢复乳腺癌细胞对激素治疗的敏感 性，因而TWIST有望成为乳腺癌治疗的新靶标和新策略。 关键词：TwIST；ERa；NuRD复合物；表观遗传学；基因抑制； 乳腺癌 The MolecularMechanismforTWIST Epigenetic Reppressing andit’SClinical EstrogenReceptorLalpha