VEGF-B基因靶向siRNA对肝癌细胞裸鼠皮下种植瘤的作用.pdf

目 录 中文摘要……………………………………………………………………l 英文摘要………………………………………………………………………3 研究论文VEGF—B基因靶向siRNA对肝癌细胞裸鼠皮下种植瘤的影响 前沿………………………………………………………………………6 材料与方法………………………………………………………………7 5 结果……………………………………………………………………1 附图……………………………………………………………………16 附表……………………………………………………………………22 讨论……………………………………………………………………24 结论……………………………………………………………………27 参考文献………………………………………………………………28 综述血管内皮生长因子家族及小干扰RNA与原发性肝癌的研究进展31 致谢…………………………………………………………………………43 个人简历……………………………………………………………………44 中文摘要 VEGF．B基因靶向siRNA对肝癌细胞裸鼠皮下种植瘤的影响 摘 要 目的：原发性肝癌(简称肝癌)是我国常见的消化系统恶性肿瘤之 一，起病隐匿、恶性程度高、进展迅速，多数患者在症状出现时已处于中 晚期而错失手术机会，手术治疗仍是治疗肝癌的首选方法，但多数患者在 术后2年内出现肿瘤复发，术后肿瘤转移和复发已成为影响肝癌患者能否 长期生存的主要问题，而肿瘤血管新生是肿瘤生长和转移的主要原因。血 endothelialfacter members， 管内皮生长因子家族(vascular growth family VEGFs)在血管新生过程中起关键作用。作为VEGF家族成员之一的 VEGF．B在肝癌进展过程中呈现高表达状态，并影响肝癌患者的预后。因 此抑制VEGF．B基因表达有望成为治疗肝癌的一种新手段。RNA干扰 (RNA stranded 源的双链RNA(double interference 发生降解而产生基因表达沉默的效果。其中小干扰RNA(small 片段dsRNA分子。以质粒或者病毒为载体将靶向基因siRNA导入细胞， 并对特定基因产生沉默。本研究利用RNAi技术，设计针对VEGF—B基因 的siRNA，转染肝癌细胞株HepG2细胞，通过建立裸鼠皮下种植瘤模型， 观察实验组与对照组种植瘤的生长情况，并应用免疫组织化学染色法检测 各组VEGF—B蛋白表达情况。 染入人肝癌细胞株HepG2细胞，分别建立阴性组(对照组)EgO以及三 别接种于4组裸鼠皮下(每组6只，随机分配)，建立人肝癌细胞裸鼠皮下 植瘤的生长情况，30天后处死裸鼠，对比测量4组裸鼠皮下种植瘤的体 积、重量，并用免疫组织化学染色法检测分析VEGF。B蛋白的表达。采 中文摘要 Plus6．0图像分析系统进行相对定量分析，计算每个视野的 用Image．Pro 单位面积内阳性染色积分光密度值(IOD)，取其均值进行统计分析。 ．结果： 染入人肝癌细胞HepG2细胞，48小时后转染效率均达60～70％。 2 24只裸鼠皮下均成瘤，3个实验组裸鼠皮下种植瘤平均生长速度 (O．730+0．1l 8)g。3个实验组种植瘤体积及重量均显著小于对照组(尸O．05)， 种植瘤未见远处转移。 (Ec0)结果分别为： (O．072+0．016)， 蛋白表达水平显著低于阴性对照组(PO．05)。 结论： 长及瘤组织VEGF—B蛋白的表达。 关键词：原发性肝癌； 鼠；免疫组织化学染色