七氟醚预处理对大鼠缺血再灌注心肌细胞自噬的作用.pdf

目 录 中文摘要…………………………………………………………………一1 英文摘要…………………………………………………………………．．4 研究论文七氟醚预处理对大鼠缺血再灌注心肌和白噬的影响 —1￡一—jo 日IJ吾…………………………………………………………………．．9 材料与方法…………………………………………………………lO 结果…………………………………………………………………20 附图…………………………………………………………………22 ’附表…………………………………………………………………32 讨论…………………………………一……………………………．．34 结论………………………………………………………………．．39 参考文献…………………………………………………………．．39 综述 自噬作为心脏疾病治疗的靶点…………一…………．．43 致谢………………………………………………………………………．54 个人简历…………………………………………………………………55 中文摘要 七氟醚预处理对大鼠缺血再灌注心肌细胞自噬的影响 摘 要 目的：通过观察七氟醚预处理对大鼠缺血再灌注心肌细胞自噬作用的 影响，探讨七氟醚预处理对缺血再灌注损伤心肌早期保护作用的可能机 制，为临床应用七氟醚提供理论参考。 方法： 1实验分组与动物模型制备 北医科大学实验动物中心提供，采用随机数字表法随机分为3组(咒=15、)： 血再灌注组(I／R组)，结扎左冠状动脉前降支，阻断冠脉血流缺血30min， 再灌注120min制备心肌缺血再灌注模型；七氟醚预处理+缺血再灌注组 维持15min，洗脱15min后，结扎左冠状动脉前降支，阻断冠脉血流缺血 30min，再灌注120min。 大鼠禁食水8h后称重，腹腔注射3％戊巴比妥钠(50mg／kg)麻醉， 仰卧位固定，在其躯干下放置自制暖水袋，躯干上方放置60w白炽灯， 通过调节白炽灯到大鼠躯干的距离及更换暖水袋来维持大鼠的肛温在 37．0一37．5℃，四肢连接针形电极，通过连接监护仪持续监测II导联心电 图。经口气管插管，连接啮齿类小动物呼吸机，行机械通气并连接多参数 麻醉气体监护仪检测呼吸。于颈部正中切口剥离颈前肌肉，暴露主支气管， 用3-0丝线在主支气管下穿线结扎气管导管和主支气管避免漏气，分离左 侧颈总动脉穿刺置管检测动脉压。胸前剪毛并消毒，于胸骨中线左旁开 O．5cm处切开皮肤，断开3、4肋，打开心包，暴露心脏，于左心房置入 套管针，轻推入左心室，测量左室发展压。在左心耳与肺动脉圆锥间可见 与左冠状动脉伴行的心大静脉，以心大静脉为标志在左心耳根部1-一2mm 后剪开结扎线再灌注120min，实验过程中间断腹腔注射戊巴比妥钠维持 中文摘要 结扎部位远端心肌外膜发绀，心肌收缩运动减弱；MAP下降，心率由慢 转快又迅速转慢，心电图出现QRS波宽度及高度增加，ST段抬高，T波 增高。再灌注成功的标志：肉眼观察缺血心肌颜色、左心室收缩运动较缺 血期末好转；MAP较缺血期末升高，ST段、T波和QRS波宽及波高均 显著下降，但仍高于缺血前水平。 2检测指标与标本采集 2．1血流动力学指标：监测并记录房室导管穿刺成功后稳定10min(To)、 30min(T4)、再灌注1h(T5)和再灌注2h(T6)时的心率(职)、平均 记录各时间点的左室发展压(LⅥ)P=LVSP．LVDEP)。 2．2生化指标：再灌注120min末经颈动脉置管处抽取动脉血3ml，离心 度。 2．3梗死面积测量及心肌细胞白噬检测：取血后重新结扎冠状动脉前降 氮唑)双染色法测定心肌梗死面积。每组中随机抽取5只，取心肌标本用 于电镜观察：取血后快速取下心脏在冠脉结扎线下约0．5cm处取一小块心 mm 肌修剪成3块1 3心肌，置入4％戊二醛中，放入4℃冰箱备用。 2．4 室LC3．II和Beclin．1蛋白的表达情况。 结果： 1三组大鼠的体重比较差异无统计学意义(PO．05)。 2血流动力学测定结果 2．1平均动脉压与心率