Ⅰ型糖尿病相关抗原ChgA的HAL-A0201限制性表位的合成及鉴定.pdf

目 录 中文摘要………………………………………………………………一1_ 英文摘要………………………………………………………………-5- ‘ 前刖 言…………………………………………………………………………………．1舌…………………………………………………………………………………。l00． 材料与方法…………………………………………………………．一14一 纠了7K…………………………………………………………………………………一二u一结 果…………………………………………………………………………………一26一 讨 论……………………………………………………………．一47一 结 论……………………………………………………………．一55- 参考文献……………………………………………………………．一56一 致 谢……………………………………………………………．-61一 基于胰岛素的I型糖尿病抗原治疗研究进展……………………．．62— 万方数据 j 絮木中文摘要 、．㈣．Y碧80㈣9539u薹539 目的：I型糖尿病(Typel 反应性CD4+和CD8+Y细胞介导破坏后，胰岛素分泌绝对不足而造成的自 身免疫性疾病。现已公认，在非肥胖性糖尿病(nonobese T 细胞(cytotoxic 对胰岛B细胞的自身免疫攻击进行抗原特异性的免疫干预与阻断，可以 重新建立机体对胰岛B细胞自身抗原的免疫耐受，是一种可能从根本上 预防T1D发生和发展的理想途径，故寻找T1D发病过程中重要的靶标抗 原以诱导免疫耐受具有重要意义。大多数胰岛13细胞自身抗原都可以被 acid (glutamic subunit—related 亚基相关蛋白(islet—specific catalytic glucose一6一phosphatase protein，IGRP)。嗜铬粒蛋白A(ChromograninA，ChgA)是近几年刚被 高频等位基因(HLA．A2超型占有比例为50040)，研究发现该基因与T1D 高患病风险有一定相关性。国外DavidVS研究小组建立了一个 +本课题由国家自然科学基金项目(NoNo资助 万方数据 细胞表位的鉴定，从而解决了实验研究中胰腺组织样本极少且很难获取， 外周血中自身反应性CD8+T细胞数量极少的问题，使关于T1D患者 细胞表位肽，对继续深入研究眦A．A2超型表位有较大的参考价值，对T1D 基于超型表位的耐受诱导治疗提供新的候选靶标抗原表位具有一定价值。 对预测结果进行综合分析，得到与肌A．A*0201限制性候选表位肽，再应 用间接荧光标记法检测候选表位肽与甩A．A*0201的相对亲和力。再进行 体外细胞功能试验，通过ElispotAssay检测候选表位肽诱导小鼠脾淋巴细 胞增殖的能力，利用以上两个实验对候选表位肽进行初筛；再通过胞内因 判断其诱导细胞因子的能力，同上方法检测其诱导表达perforin的水平以 判断细胞毒作用的大小，并利用mA—A2抗体阻断T2抗原提呈，以判定 理论值吻合。2．通过间接免疫荧光法检测四条抗原表位肽与甩A．A*0201 分子的相对亲和力，得到各抗原表位肽的相对荧光强度FI。ChgA】0_。9和 万方数据 异，P0．05。3．通过[3H]胸腺嘧啶摄取法评价候选表位肽刺激脾淋巴细胞 ChgA 比统计学无差异，P0．05。与InA2．10组CPM893 万方数据 的免疫优势的mA．A*0201限制性表位肽。