动物组织中DNA提取方法的优化.pdf

2009年第2期(总第72期) 中国现代黼装备 动物组织中DNA提取方法的优化· 沈剑敏 周桂花 兰州大学 甘肃兰州 730000 摘要：为了提高生物化学实验的教学效率，对脱氧核糖核酸几种提取方法中的几个关键步骤作了定性定 量分析，对鏊个流程加以优化，简化了操作步骤，缩短了实验时间，经过几年的实践，已成功运用于该校 本科生生物化学实验教学环节，取得了良好的教学效果。 关键词：动物组织DNA蛋白质变性剂提取 由于招生规模的扩大，目前学生人数已是十几年前 编著的《生物化学实验原理和方法》[1]一书，其中的 的两倍甚至更多，为了保质保量打好基础，往往要求学 “猪脾脏DNA提取与二苯胺测定法”是必做实验。尽管 生单人单组进行操作。另外，为了培养学生自主创新能 该DNA提取方法较为成熟，但材料用量大，来源相对困 力，教学计划中增加了综合和创新实验的课时比例，减 难，还需冰箱内过夜，提取时间太长，而且提取过程稍 少了基础实验的课时比例，但是教学内容几乎没有减 有不慎很容易失败，所以笔者结合李如亮主编的《生物 少，这给基础课实验教学提出了更高的要求。 化学实验》[z]和陈钧辉主编的《生物化学实验》【¨， 生物化学实验中脱氧核糖核酸的提取是许多高校生 从选择合适的提取材料入手，比较了几种DNA提取方法 物学科学生必做的实验。其主要的方法一般采用苯酚 的优缺点，优化组合成了一种操作简便、省时、无需昂 法、氯仿法和去污剂法[1]，或者是这几种方法的组 贵药品的新方法。 合，其主要思路是两条：第一，利用核蛋白在不同浓度 一、优化后的实验流程 的盐溶液中溶解度的不同，将RNA核蛋白与DNA核蛋白分 开；第二，利用有机溶剂，并辅以其他物理作用使蛋白 1．取新鲜的动物组织(一般为肝脏或脾脏)5克， NaC卜0．015mol／L柠 质变性，形成凝胶，与核酸分开。此外，在整个提取过 剔去结缔组织，用0．15mol／L 程中，为了避免DNA被降解破坏，要防止过酸和过碱等 檬酸钠溶液洗去血水，剪碎并研磨。 化学因素、高温和机械力等物理因素以及核酸降解酶的 2．用40raL0．15mol／L 作用。 一 钠溶液将肝糜转移至离心管，3000r．P．m离，blain。 自1996年以来，我校一直采用北京大学李建武等 3．弃去上清夜，收集沉淀，重复第②步，再弃去 上清液(重复洗涤可使RNA核蛋白与DNA核蛋白尽可能分 008-1 开，又可以脱去血色素，使产品洁净)。 收稿日期：2 1—04 NaCl— 作者简介：沈剑敏，硕士，高级实验师。 4．沉淀物悬子25mLpH8．0的0．15mol／L · 本文系国家基础科学人才培养基金项目 0．1mol／LEDTA中。 0030053)． (j 5．缓慢滴加lo％SDS溶液3mL，边加边搅。 ，一、 fME导孑喇倒磊翮彤@P缎俐∥ 7口。 V 万方数据 中国观代苏青装备 6．60。C恒温水浴保温10min，不断搅动，溶液变 在以上流程的第①～④步中依次使用，可得到较好的实 为粘稠并略有透明。