Myostatin基因免疫载体的构建及其对小鼠肌肉增殖.docVIP

　　Myostatin基因免疫载体的构建及其对小鼠肌肉增殖 第一篇文献综述 第 1 章 Myostatin 基因的研究进展 增加骨骼肌的数量及肌纤维大小，对于人类健康和农业应用都是非常重要的。提到骨骼肌增殖那么就不得不提有一种与骨骼肌生长增殖密切相关的基因：肌生成抑制素 Myostatin（MSTN）：别称 GDF-8，是 TGF-beta;超家族中 GDF 亚族的一员[1, 2]。1997 年，Mcphenrron 和 Lee 的小组，以小鼠 DNA 为模板，用 TGF-beta;同源保守区设计简并引物，得到长度约 280bp 的产物，用来筛选其骨骼肌的cDNA 文库，最终获得整个 cDNA[3, 4]。Myostatin 基因序列中包括一个 ORF，它可以编码 376 个氨基酸，是一种分泌型的多肽[5]。且和家族其他成员之间同源性很低[6]。肌生成抑制素是 TGF-beta;超家族中是独一无二的，所以把它单独作为新的生长因子--GDF-8。Myostatin 的表达从胚胎肌节到成人横纹肌几乎完全是在骨骼肌谱系的细胞内。其机理是一系列的突变导致基因所编码的蛋白质失活，从而不能调节肌纤维的降解活动[7, 8]。由于 Myostatin 是肌肉的抑制调控因子，能够使其失去正常的生物活性造成肌肉的肥大增生，所以，遵循它的功能把它叫做肌生成抑制素。虽然没有任何证据说明 Myostatin 对活力或生育是必不可少的，但是 Myostatin 已经非常好通过进化保持其保守性。人类，大鼠，小鼠，猪，火鸡，和鸡蛋白序列中该蛋白质的 COOH 端的生物活性是完全相同的[9]。Myostatin 基因靶向突变的小鼠表现出肌肉的显著性增加，其肌肉含量甚至比对照组小鼠高达2 至 3 倍[10]。早在 19 世纪，类似的表型首次在牛身上发现，具有双肌性状的比利时蓝牛和皮埃蒙特牛被证实其身上的骨骼肌质量比正常牛大约增加了近 20％[11]，即产生双肌性状，而这一现象的原因也被归因于 Myostatin 基因的突变[12-14]。 1.2 Myostatin 基因的定位 1988 年，Gonzalez-cadavid 等对人 Myostatin 基因进行了研究分析得到：人Myostatin 基因位于 2q32.2，基因全长约为 7.7kb，该基因有 3 个外显子，它们各自编码 125 个、124 个及 126 个氨基酸用来编码前体蛋白[24]。包含 3 个可以起始转录的位点并产生 3.1kb 的 mRNA 产物。1997 年，Smith 等对牛 Myostatin 基因进行研究得出结论，牛的 Myostatin 基因在 2q14-q15 的着丝点周围，和微卫星标记(TGLA44)相距离 3.1 厘米[25]。Grobet 等在 1998 年利用微卫星标记和分离分析了牛 Myostatin 基因，确定 Myostatin 基因的位置是在 2 号染色体相距微卫星和着丝点之间大概 2 到 3 厘米左右[26]。牛的 Myostatin 基因全长 2761bp。牛的Myostatin 基因包含 3 个外显子和 2 个内含子，第 1、2 外显子被第 1 内含子分开，构成一个包含 375 个氨基酸的前体蛋白。1999 年，Sonstegard 等对猪的 Myostatin基因研究分析，并运用荧光原位杂交技术，发现猪该基因的位置在 15q2.3，同样由2个内含子和3个外显子构成[27]。2001年，欧阳红生等克隆了猪的Myostatin 基因并研究了 5调控区，其研究结果表明猪 Myostatin 全长为 1756bp，在 308bp处为起始密码子，第 1 外显子编码前 124 个氨基酸和第 125 氨基酸密码子的首个碱基，第 2 外显子编码第 125 氨基酸密码子的第 2 和第 3 个碱基和此后的到第249 个氨基酸，总长 371bp，第 3 外显子编码此后的到第 375 个氨基酸[28]。1999年 SazanovA 等对鸡的 MSTN 基因进行报道，鸡 cDNA 的长度为 1081bp，定位在7p11 上[29]。3 个外显子大小分别是 373、373 和 382bp，3 个内含子大小分别是2094 和 2269bp[30]。 .. 第 2 章 基因免疫的概述 2.1 基因免疫的发现与发展 在 20 世纪 90 年代初期，基因免疫的概念在 HC-I 和（或）MHC-Ⅱ类的抗原处理和传递的途径将重组质粒所携带的抗原信息递呈给 T 淋巴细胞，机体的细胞免疫系统及体液免疫系统随之被激活，产生特异性的体液免疫和（或）细胞免疫应答[80]。基因免疫的出现标志着第三代免疫革命的打响。最初的报告显示，直接将携带真核基因的裸露质粒 DNA 注射到哺乳动物肌肉内，导致内源性的表达