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　　专业定制基因工程学论文毕业论文：概述动物胚胎生物技术的发展历史 动物胚胎生物技术是现代生命科学研究的基础之一。近30年来，随着生命科学的发展，这些技术得到了长足的发展。胚胎生物技术主要涉及对动物配子及胚胎的操纵。包括超数排卵、胚胎培养、胚胎保存、胚胎移植、体外受精与显微受精、孤雌生殖、胚胎分割与嵌合、基因转移、细胞核移植技术等等，本文就这些技术的发展及在实验动物上的应用前景作一概述。 1 超数排卵、胚胎移植 超数排卵、胚胎移植技术在实验动物、家畜上已比较成熟，实际应用中已程式化，在此不再赘述。 2 体外受精与显微受精 2．1 体外受精体外受精是由华裔科学家张明觉等发现动物精子获能现象开始的，第一例试管动物是1959年出生的试管兔。目前已有近20种实验动物体外受精获得成功，在小鼠、大鼠、兔、猕猴和多种家畜及人获得了后代[1]。随着动物卵母细胞体外成熟(IvM)一体外受精(IvF)一体外培养(IVC)技术的成熟，体外受精已在生物学研究许多领域得到应用。实验动物体外受精的研究大部分立足于基础理论，研究结果对发育生物学、受精生物学、生殖生物工程论文学起到了重要作用。体外受精所用的精子在大、中型动物卵子可采用人工按摩或电刺激法获得，小型动物需用手术法从附睾获得。卵子有两种方法，小型动物系采用超数排卵处理，从输卵管采集体内成熟卵子；或用手术法，从卵巢上采集未成熟卵子进行体外成熟。大、中型动物可利用活体采卵或屠宰卵巢获得。 目前制约体外受精的主要因素是： ① 在体外培养的卵母细胞，其细胞质是否真正成熟不仅影响到受精，而且对卵裂及胚胎发育也有较大影响，应在培养条件上进行研究。 ② 多精受精难以控制，导致能正常发育的比率低，这一点在猪体外受精中尤为突出；一般可通过调整精子浓度或受精时间来控制。 ③ 体外受精的胚胎在体外发育至一定阶段时发生退行性变化，即发育阻滞(block)，不同动物其阻滞阶段亦不同，运用体细胞共培养或在培养液中添控制特殊成分能获得一定的改善。 ④ 季节性繁殖的动物，在非繁殖季节内，卵母细胞体外成熟比较困难。 2．2 显微受精在体外受精的基础上，随着显微操作技术和设备的完善，出现了显微受精技术。是指通过对动物配子进行显微操作以协助其受精的技术，其特点是显微受精过程不受精子数量、活力及形态等因素影响。目前有透明带下注射、透明带钻孔、透明带部分切口、卵细胞质内注射等方法。前三种技术可排除透明带对精子入卵的屏障作用，这时的精子应是能运动的，而且能与卵质膜融合；卵细胞质内注射则可排除透明带和精卵质膜融合这两重屏障作用，故即使精子是不能活动的、死的。甚至是不完整的，也能产生后代。最早进行这项工作的是Uehaya和Yanagimachi，他们将人和仓鼠的精子显微注射到仓鼠的卵母细胞内获得了原核。在小鼠首先获得了显微受精后代，用不活动的兔精子注射到卵母细胞质内也获得了后代。1993年，我国获得了首倒显微受精仔兔 ，以后又获得了显微受精小鼠。该技术工程论文在动物(人)受精和发育机理研究方面具有广阔的应用前景。 3 孤雌生殖 动物卵子在没有雄性配子参与的情况下进行自发发育的现象称孤雌生殖。休止于第二次减数分裂中期(M I)的卵母细胞可通过物理方法(机械刺激、改变温度、电刺激)和化学方法(酶处理、渗透压、离子浓度、麻醉剂和蛋白质合成抑制剂)等激活。研究表明，用乙醇、透明质酸酶、电刺激均能引起小鼠和兔卵母细胞发生孤雌活化。小鼠的孤雌活化胚在受体内妊娠至11d，发育到25个体节，可见到心跳和卵黄囊循环。大鼠卵母细胞用PHA处理，体外发育至囊胚口 。将孤雌活化胚与正常胚嵌合后，可发育成嵌合体，孤雌胚细胞能形成各种组织。但距离产生孤雌生殖后代尚有一定距离。 4 胚胎分割与嵌合 4．1 胚胎分割Spemann(1901)-fi-次将蛙第一次卵裂后的两个卵裂球分离开，人工地产生了双胞胎。Mullen等(1970)将小鼠2一细胞胚胎的两个卵裂球分离，经培养后再移植给受体，产生了哺乳动物的第一例人工双胚胎；Mular等于1968年将兔的28细胞胚胎一分为二移植后获得成功。Moustafa等(1978)又成功地将小鼠桑葚胚一分为二，得到双胞胎。RC冻存了近1000个品系，25万枚小鼠胚胎美国国立卫生研究院冻存了140多个品系的小鼠胚胎[2]。我国在这方面也取得了很大的进展，已建立了国家啮齿类保种中心，国家啮齿类胚胎库也在筹建中。 配子与胚胎的冷冻保存可应用于： ① 建立胚胎库； ② 保存基因库，免受遗传污染及遗传漂变的危害； ③进行国际间交流； ④ 动物的保种，特别是珍稀、濒危动物的保种； ⑤ 为胚胎生物技术提供可用胚胎； ⑥ 应用于基因工程动物(KI．KO 动物等)的生产与资源共享；用于病原体感染动物的生物净化。 6 胚胎干细胞(ES．细胞) ES细胞是从早期