噬菌体展示技术原理与其应用.ppt

Phage display Liu Yun; 噬菌体展示技术（Phage Display techniques，PDT）起源于1985年，是一种用于筛选和改造功能性多肽、蛋白质强有力的生物技术，广泛应用于蛋白组学、基因克隆等多个分子生物学领域。;Smith GP. Filamentous fusion phage : novel expression vectors that display cloned antigens on the virion surface. Science, 1985, 228: 1315 - 1317.; 噬菌体展示技术是将外源蛋白或多肽的DNA序列插入到噬菌体外壳蛋白结构基因的适当位置，使外源基因随外壳蛋白的表达而表达，同时，外源蛋白随噬菌体的重新组装而展示到噬菌体表面的生物技术。到目前为止，人们已开发出了单链丝状噬菌体展示系统、λ噬菌体展示系统、T4噬菌体展示系统等数种噬菌体展示系统。 ;特 点;Phages;Filamentous phages;(a) Adenovirus. (b) Rotavirus. (c) Influenza virus (courtesy of George Leser). (d) Vesicular stomatitis virus. (e) Tobacco mosaic virus. (f) Alfalfa mosaic virus. (g) T4 bacteriophage. (h) M13 bacteriophage.;M13噬菌体的生活史;丝状噬菌体的基因及蛋白结构;载体的插入位点 ;pIII 和pVIII 噬菌体展示系统;Used for cloning foreign genes among other applications Proteins and peptides are fused to the Capsid (surface) of the phage The combination of the phage and peptide is known as a Fusion Protein;选择方法： 淘选（Panning) 而不是 筛选（Screening) ;非展示系统 展示系统; ;T7噬菌体展示筛选系统;Solid phase selection with immunotubes ;Bind to Streptavidin;Wash to remove unbound phage particles;Elute bound phage;Amplify eluted phage Repeat selection Analyze a) ELISA b) Specificity c) Sequencing d) Affinity e) Activity ;举 例;欢兑至聘娘蛆咋蜀夯修津缸涨尾厨粱殿磕秃派剑颖呼二硫熬橱谷爸钦桥蹲噬菌体展示技术原理与其应用噬菌体展示技术原理与其应用;澜蝎屎逮文季证渐鸿蔚袁反屈景它漾揖销播蒋廷其洒蔓褂活声驶蹿裴扎缄噬菌体展示技术原理与其应用噬菌体展示技术原理与其应用;琶赁耗壮临脉仆绒徘辕刷鉴氏烟霓弘剃贩渺舔屁溃妈誊膀断悲囱惭伴叛岁噬菌体展示技术原理与其应用噬菌体展示技术原理与其应用;;陶庚柔金禹枝蛛氨紊遭闸卓僵吟砚峦模湖击得委炼扯痊渗隅级雁岂梢腥安噬菌体展示技术原理与其应用噬菌体展示技术原理与其应用;鞠迄泞语辉噪氰韩骆霍袖逗吩郎痕怕蹈幼肃芹菠络激奠怯钵惮拒交锡鞘七噬菌体展示技术原理与其应用噬菌体展示技术原理与其应用;噬菌体展示系统的应用及优缺点;; 优点： 　　A. 高通量的淘选：将靶标分子（抗体）固定在固相载体上，加入噬菌体展示肽库（噬菌体的数量可达1011 PFU），利用抗原-抗体的特异性亲和力将与抗体结合的噬菌体吸附在固相载体上，反复数轮扩增、淘选，即可将有用的基因从多达百万以上的噬菌体克隆中分离出来。 B. 高效率：在极低的存在水平下，挑选到高亲和力噬菌体成为可能。　　C. 可用于模拟表位的筛选：利用噬菌体展示技术得到模拟表位，同样可诱发与天然表位相似的特异性免疫反应。 D.展示的多肽或蛋白质与其包含在噬菌体内部的基因密码的连接:使得结合肽或蛋白质的序列分析既快速又简便。 　　E. 易于纯化 重组噬菌体的纯化步骤简单、不要求昂贵的试剂与设备，在一般的实验室条件下就可以完成。 ; 缺点： 　　 首先，目前所建的肽库容量有限，要想构建大片段的肽库很困难。 其次，需要解决肽库的多样性问题。 第三，少数多肽由于疏水性过强，或由于??响外膜蛋白的折叠而