第五章_分子发光分析法(好).ppt

萤火虫发光 16世纪人们发现紫外和可见光照射到某些物质时，这些物质会发光，当光照停止时，物质发光会停止。 1852年斯托克斯（stokes) 进行了解释。 1867年Goppelsroder应用铝-桑色素络合物的荧光对铝进行了测定。 现在已是一种重要的分析方法 一、荧光和磷光光谱的产生 具有不饱和基团的基态分子光照后，价电子跃迁产生荧光和磷光 基态分子 价电子跃迁到激发态 分子能级与跃迁 基态(S0)→激发态(S1、S2、激发态振动能级)： 吸收特定频率的辐射(是量子化的)；跃迁一次到位； 第一、第二、…电子激发单重态 S1 、S2… ； 第一、第二、…电子激发三重态 T1 、 T2 … ； 激发态→基态： 　　多种途径和方式(见图8-1)；速度最快、激发态寿命最短的途径占优势； 振动施豫(VR): 同一电子能级中，电子由高振动能级转移至低振动能级而将多余的能量以热的形式发出，振动施豫时间为10-12s。 内转移(ic) ：当两个电子能级非常靠近以致其振动能级有重叠时，常发生有高能级以无辐射跃迁方式转移至低能级。 外转移：激发分子与溶剂分子或溶质分子的相互作用及能量转移而去活的过程称外转移。 使荧光或磷光强度减弱或消失的过程（熄灭或淬灭）。 系间窜越跃迁(isc) ：指不同多重态间的无辐射跃迁。改变电子自旋，禁阻跃迁。 辐射能量传递过程 荧光发射：电子由第一激发单重态的最低振动能级→基态（多为 S1→ S0跃迁），发射波长为 ? ′2的荧光 10-8～10 -10 s 。 由图可见，发射荧光的能量比分子吸收的能量小，波长长；? ′2 ? 2 ? 1 ； 磷光发射：电子由第一激发三重态的最低振动能级→基态 （T1 → S0跃迁）； 电子由S0进入T1的可能过程：（ S0 → T1禁阻跃迁） S0 →激发→振动弛豫→内转移→系间跨越→振动弛豫→ T1 发光速度很慢： 10-4～10s 。 光照停止后，可持续一段时间 pH 的影响 镜像规则的解释 每一个吸收能级对应一个发射峰，构成镜像关系。原则上，如果一个电子从一个能级吸收能量跃迁到另一个能级，产生一个吸收峰，再释放出来，形成一个发射峰，这种匹配是合理的。如果电子处于激发态时不经驰豫(relaxation)直接反回基态，那激发峰和发射峰是完全重叠的；但事实上，处于激发态的电子往往要经过驰豫，释放声子（热运动），然后再回到基态，因此产生了Stokes位移，此时产生的发射峰波长长于激发波长，构成了一一对应的镜像关系。在有些情况下，吸收的光完全以声子的形式释放，则在发射峰中没有对应的峰，这也是完全可以的。也就是说，镜像关系并不总是成立的。 随着溶液浓度的进一步增大，将会出现发光强度不仅不随溶液浓度线性增大、甚至出现随浓度的增大而下降的浓度效应。 4.3　化学发光分析法 化学发光是由化学反应提供的能量激发物质所产生的光辐射。 生物发光是指产生于生物体系中的化学发光。 基于这类发光现象的分析方法，称为化学发光分析法。 优点：(1)灵敏度很高。 (2)仪器设备简单，无需光源和单色器；(3)线性范围宽；(4)分析速度快。 局限性：可供应用的发光体系有限，发光机理有待进一步研究，方法的选择性有待进一步提高。 一、化学发光基本原理 1、发光机理 　　一些物质在进行化学反应时，吸收了的化学能，使产物分子激发至激发态，返回基态时发射出光子。 能产生化学发光的反应的基本要求： 化学反应能提供足够的能量； 反应的历程应有利于激发态产物的形成； 产物激发态分子必须能释放出光子或转移给另一分子放出光子。 化学发光效率ΦCL： 生成激发态产物的效率ΦCE： 激发态产物的发光效率ΦEM： 2.化学发光强度与化学发光分析的依据 （3）取代基效应 （i）给电子的取代基：如－OH，－NH2，－NR2，－OR等，p-p共轭，使荧光增强。如：苯胺、苯酚苯， （ii）吸电子的取代基：如－NO2，－COOH，－NO等使荧光减弱。如：硝基苯为非荧光物质。 （iii）卤素取代基随原子序数的增加，物质的荧光减弱，而磷光增强 （重原子效应：重原子取代促进了荧光体中的电子自旋-轨道的偶合作用，系间窜越S1—T1概率大）。 三、影响分子发光的环境因素 1．溶剂的影响 　荧光体的基态与激发态的偶极矩不同，与溶剂分子的偶极之间存在的静电相互作用也不同； 　激发时发生π→π＊跃迁，激发态的极性更大，若溶剂极性增大，荧光光谱向长波方向移动； 　荧光体与溶剂之间发生了特殊的化学作用（如形成氢键）。 0.002 390 2.24 四氯化碳 0.041