热休克蛋白质DnaK的纯化及其二聚体性质研究.PDFVIP

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2017-07-28 发布于江苏
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热休克蛋白质DnaK的纯化及其二聚体性质研究

第 31 卷第期天津科技大学学报 Vol. 31 No. 2016 年月 Journal of Tianjin University of Science Technology .2016 DOI:10.13364/j.issn.1672-6510 热休克蛋白质 DnaK 的纯化及其二聚体性质研究 1, 2 1 1 1 1, 2 1, 3 刘清岱，苏家跃，田雪利，杨营，赵飞，盛长忠 (1. 天津科技大学食品工程与生物技术学院，天津 300457 ；2. 天津天隆种业科技有限公司，天津 300457 ； 3. 丹娜 (天津)生物科技有限公司，天津 300457) 摘要：通过定点突变技术构建了两个 DnaK 蛋白质突变体，研究腺嘌呤核苷三磷酸 (ATP)和腺苷二磷酸 (ADP)条件对热休克蛋白质 DnaK 二聚体性质的影响．首先诱导表达 DnaK 蛋白质的两个突变体 DnaK-A303C 和 DnaK-H541C ，并采用硫酸镍亲和层析和阴离子交换层析对重组蛋白质进行纯化．对等量的 DnaK 蛋白质进行氧化交联处理，然后采用聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS)检测 ATP 、ADP 对 DnaK 二聚体的影响．研究表明 DnaK 突变体在 ADP 的存在下以同二聚体的形式存在，但是在 ATP 条件下能够形成异二聚体．由此为深入认识热休克蛋白质两个亚基之间的协同作用提供了实验依据．关键词：DnaK ；ATP ；二聚体；突变体中图分类号：TS201 文献标志码：A 文章编号：1672-6510 (2016)00-0000-00 Purification of DnaK Mutants and the Characteristics of DnaK Dimer 1, 2 1 1 1, 2 1, 3 LUI Qingdai ，SU Jiayue ，TIAN Xueli ，YANG Ying ，ZHAO Fei ，SHENG Changzhong (1．College of Food Engineering and Biotechnology ，Tianjin University of Science Technology ，Tianjin 300457 ，China ； 2．Tianjin Tianlong Seeds Science and Technology Co. ，Ltd ，Tianjin 300457 ，China ；