北医本科课件《生物化学》生化实验往年考题-打.docVIP

总体来讲，生化实验考试不难 只要你平时实验认真做了 这个40分中拿到35不是很难。总体分布：实验原理70% 实验操作10% 思考题20%题量很大，所以记得不清楚了，只列出考点 1.Abs=-logT=KCL 2.考马斯亮蓝染色法 吸收峰的变化465-595，感觉这道题有点偏 考马斯亮蓝检测蛋白质，奈氏试剂检测硫酸铵 3.SDS凝胶电泳之测量分子量方面优于醋酸纤维素膜电泳的原因 上层浓缩胶，下层分离胶，快离子氯离子，慢离子甘aa 4.SDS的三个效应，在填空和大题都有考到，自己看书，冗长故不赘述与此 5.影响酶活性的因素 6.碱裂解法提取质粒DNA：各试剂的作用 7.质粒DNA酶切后的三种构型，迁移率：超螺旋线性开环 8.PCR：如何预防出现假阳性结果 本次难题：实验设计：有一DNA片断，嵌于质粒中，如何获得大量的这个玩意儿 我的答案：1.细菌培养，提取质粒，酶切 2.直接PCR（或细菌培养而后PCR） 生化实验考试不难，希望大家能好好复习生化，好好做实验。^_^ 2006 1 9 生化实验考题一、 填空15分 1 吸量管的量程为20μl，200μl，1000μl时图示表示的容量为__,__,__。 2 层析时两相为__,__。 3聚丙烯酰胺凝胶电泳分辨率高的原因有__,__,__。 4聚丙烯酰胺凝胶电泳上层为__,下层为__，快离子为__,慢离子为__。 5蛋白质定量测量的方法有__,__,__。 6 PCR反应体系组成__,__,__,__,__。 7影响酶促反应速度的因素__,__,__和抑制剂，激活剂。 8 Vm不变的为__抑制剂，Km不变的为__抑制剂。 9蛋白质沉淀的机理__,__。 10限制性核酸内切酶识别的序列为__，切割完后末端有__,__。 二、 简答25分 1 两离心管，一有0.5ml，一有1.0ml，想离心13000rpm，10分钟，如何操作2分 2酶促反应为什么用初速度表示？2分 3 Km值较小，如何测的精确？3分 4 PCR的应用？（至少写出四种）4分 5那些环节纯化质粒DNA，（如何去除基因组DNA，RNA，蛋白质）？4分 6分析提取、酶切反应、琼脂糖凝胶电泳结果（有图）5分 7分析醋酸纤维素膜电泳，SDS对同一溶液产生不同数量条带的原因（有图）5分 1． 分光试验中要配一管空白液的作用 2． 蛋白质定量测定的方法（至少三种）我们试验用的是什么方法？ 3． SDS试验中加入甘油和溴酚蓝的作用 4． 如果想提纯一混合蛋白质，并对其做生物活性的测定，是用凝胶过滤层析还是醋酸纤维膜电泳 5． SDS为什么可以测定蛋白质的分子量 6． 如何提纯质粒DNA(去除原有的蛋白质，DNAＲＮＡ) 以上为简答题，填空是实验报告上的小概念，有些比较偏，我印象比较深的有： 1层析的种类 2SDS凝胶上层是____下层是_____快离子是_______ 慢离子是________ 3. SDS的三种效应 4．影响酶活性的因素有 5．质粒DNA的三种构型以及它们电泳的快慢 6．凝胶过滤层析中检测蛋白质的是？检测盐的是？ 试验平时最好就记住原理，试验指导要看详细，我考完的感觉就是我看书不细致，弄得考前感觉没什么可看的了，考后才发现还有很多都是应该掌握而我却一眼带过了：（以此为鉴啊！