北医本科课件《生物化学》生化试验思考题.docVIP

生化实验思考题总结 蛋白质定量测量的方法有哪些？简要说明其原理。 答：a.紫外吸收，在280nm处有最大吸收峰。 b.定氮法，利用蛋白质中氮元素含量为16%固定比例来测定。 c.分光光度计法，利用OD值和蛋白质浓度成正比的原理。显色剂为考蓝。 d.双缩脲法。也是利用显色反应。 e.Folin酚法。 如果凝胶过滤层析分离的蛋白质样品中含有多种蛋白质，在各蛋白质分子量已知的情况下，如何判断哪一种蛋白质时所想要的？ 答：现在假设有三种蛋白质a b c，分子质量abc。 那么，a最先流出，在体积V1处有一个洗脱体积，对应的a的溶液浓度在 V1处也最高，就会有一个OD值的峰值。b c同理。由不同的OD峰值， 对应不同的洗脱体积，就可以筛选出想要的蛋白质。如果想要b，那么在第 二个吸收峰的时候，找到相应的洗脱体积，然后在其附近的所接到的溶液 进行选取。就会得到想要的蛋白质。 如果盐析后的样品不经脱盐处理便上样电泳，对其结果有何影响？ 答：如果没有去除清蛋白里面的盐分，则会使电泳速度下降。原因在于溶液离子 强度太大，蛋白质表面的电荷减少，所以导致电泳速度下降，甚至无法泳动。 对电泳所得的结果如何进行定量分析？ 答：将电泳完毕的样品（凝胶），按条带宽度的分布剪下，分别把每个小块样品 用NaOH溶液漂洗，再将漂洗过的溶液进行OD值的测量。 使SDS具有高分辨率的三个因素是什么？ 答：浓缩效应。电荷效应。分子筛效应。 实验所得的各点数据中，哪些易出现较大的误差？ 答：有两个点。第一个，在三十秒的点，反应速度太快，时间如果掌握不准，容易 出现误差。另一个，在3min的点，反应速度很慢，斜率小，则倒数大，所以 时间掌握不好，也容易出现大误差。 假如把碱性磷酸酶对底物的亲和力提高十倍，实验方案该如何修改？ 答：把底物和酶的浓度都降低。 请举出三种提取质粒的方法，并简要说明其中一种方法的原理。 答：碱裂解（要求原理，书上有）；一步法（见书上46，47页有关TELT试剂的内容） ；SDS法；煮沸法。 分析质粒DNA切割不完全的原因。 答：a.质粒因素：碱裂解时间太长，无法复性；乙醇挥发不完全，影响酶的活性。 b.酶的因素：酶的浓度太高或者太低。或者酶的活性降低。 c.酶切体系：温度不是最适温度；时间不够长；缓冲溶液的问题。 分析酶切后没有观察到目的DNA的原因。 答：a.重组失败。 b.酶切失败。 c.目的基因量太少。 11. 从哪些方面可预防PCR出现假阳性结果？ 答：假阳性就是出现了不该出现的条带。 防止污染，例如模板的污染。 引物设计合适，保证特异性。 控制反应条件。 必要时，要减少循环次数。 Shaonanlee 黑暗舞者DID