山茱萸多糖抗HDF衰老与cyclinD1表达的关系.pdfVIP

第31卷 第1期 黑龙江医药科学 V01．31 No．1 2008年2月 HEILONGJ1ANG MEDICINE AND PHARMACY Feb． 2008 ·1· 山茱萸多糖抗HDF衰老与cyclinD1表达的关系 欧 芹，葛堂栋，王迪迪，王跃新 (佳木新大学基础医学院，黑龙江佳木斯154007) 摘要：目的；探讨山茱萸多糖对抗HDF细胞衰老作用及对细胞周期蛋白的作用。方法：体外培养HDF细胞，实验组从4O代 开始加多糖含药血清。在培养至43代、47代和5O代采用MTT法检测细胞活力，RT—PCR法检测cyclinD1的mRNA表达，并 与3O代时进行比较。结果：衰老组细胞活力下降，cyclinD1 mRNA表达升高；山茱萸多糖血清可提高细胞活力，降低HDF细胞 cyclinD1 mRNA含量表达。结论：山茱萸多糖可能通过改变细胞周期调控因子的表达而发挥其抗HDF细胞衰老作用。 关键词：山茱萸多糖；cyclinD1；人二倍体成纤维细胞(HDF) 中图分类号：Q253；R211；R285．5 文献标识码：A 文章标号：1o08一O1O4一(2008)01—0001—02 正常情况下，细胞周期的有序运转沿着G1期，S期，G2 cDNA 2O L逆转录反应体系包含以下成分：MgC12(25mM) 期和M期顺序进行，近年来，研究确定细胞周期进程的分子 4 L；10×RNA PCR buffer 2 L；dNTP(各 10raM)lbtL； 机制的核心为细胞周期蛋白激酶活性的表达与调控，在不同 Rnase inhibitor(40U／pL)0．5btL AMV(5U／btL)lbtL~Oligo 周期时相之间的转变存在若干关卡。细胞衰老周期调控的一 dT(2．5raM)lbtL；RNA样本2 L；Rnase free H2O 8．5 L。将 个重要环节是eyelinD—CDK复合物参与的G1期细胞阻 上述试剂混匀，移入PCR仪，按以下条件进行反转录反应： 滞[“。中药药理血清学方法是中药研究的一种新方法，现已 45℃60min；94℃5rain以灭活逆转录酶。100btLPCR反应体 经应用到多个领域。现代药理学研究表明，山茱萸含有山茱 系包含以下成分：MgC12(25mM)6 L；10×LA PCR buffer 萸多糖，甙类，鞣质，维生素，微量元素硒等。除具有提高免疫 8 L；dNTP(各10mM)lbtL；LA Taq E(5U／~tL)0．5 L；上游 力之外，尚有抗氧化作用。本实验以传代培养的HDF细胞为 引物(20mM)lbtL；下游引物(20mM)lbtL；cDNA 2O L； 衰老模型，用含山茱萸多糖血清处理HDF细胞，观察山茱萸 ddH2O 62．5 L。上述反应液轻轻混匀，移入PCR仪，按以下 多糖是否有抗衰老作用。同时应用RT--PCR法，探讨山茱萸 条件进行PCR反应： 多糖的抗衰老作用是否与cyclinD1有关。 94℃ 5min 1 材料和方法 94℃ 40s、 1．1 药物与试剂 55℃ 40s 34 cycle 72℃ 45s J HDF细胞是人胚肺成纤维二倍体细胞，由北京大学医 学部生化教研室惠赠。培养基：含1O％的胎牛血清(上海生工 4℃ pause 公司)的DMEM(美国Invitrogen公司)。胰蛋白酶、MTT粉 1．4 PCR产物辉度分析 (上海华美公司)。多聚赖氨酸、DEPC处理水和MOPS(上海 华舜公司)