同时感染雏鸡群的两种血清型沙门菌的鉴定及药敏试验.pdfVIP

中同采禽2008年第30-,~4期 China Poultry VoL30,No．4．2008 同时感染雏鸡群的两种血清型沙门菌的 鉴定及药敏试验 李 郁，魏建忠，李 超，王 伟，王 强，滕克东 (安徽农业大学动物科技学院，安徽合肥 230036) 沙门菌是肠杆菌科中的一个大属，目前已 1．1．4 PCR引物 有2 500种以上血清型，它们广泛存在于人和各种 根据沙门菌组氨酸转运操纵子基因序列设 动物的肠道内。在自然界中，家禽是其最主要的 计并合成一对引物[ 。 贮存宿主。禽沙门菌病是由沙门菌属中的某一种 P1：5 ACTGGCGTTATCCCTTTCTCTGC 或多种沙门氏菌引起的禽类急性或慢性疾病的 TG： 总称，由鸡白痢和鸡伤寒沙门菌引起的疾病分别 P2：5 ATGTTGTCCTGCCCCTGGTAAGA 称为鸡白痢和鸡伤寒，而由有鞭毛能运动的沙门 GA 菌引起的疾病则称为禽副伤寒。本试验系应用细 引物由上海生工生物工程技术服务有限公 菌学和PCR检测技术，对安徽省濉溪县一起可疑 司合成。 雏鸡沙门菌病进行细菌分离鉴定，从而确定病型 1．1．5 PCR试剂 类别，并对分离菌株实施血清学分型和药物感受 Taq DNA聚合酶、dNTPs、琼脂糖等均购自 性分析。 上海生工生物工程技术有限公司。DNA 1 材料与方法 Marker DL2000购自宝生物工程(大连)有限公司。 1．1 材料 1．2 方法 1．1．1 被检材料 沙门菌分离及其血清型鉴定按GB／T4789．4— 安徽省濉溪县某养鸡场9日龄临床可疑沙门 2003执行 ]。 菌病雏鸡。 药敏试验采用标准Kirby—Bauer纸片法[3]，根 1．1．2 参考菌株 据美国临床试验室标准委员会(CLSI／NCCLS) 德尔卑沙门菌 (S．derby)、明斯特沙门菌 2005版执行标准判定结果 ，分为敏感、中介度和 (S．muenster)、山夫登堡沙门菌(S．senfienberg)由安 耐药3种。 徽农业大学动物科技学院传染病实验室保存。 分离菌DNA提取。将ss平板上的细菌培养物 沙门菌志贺氏菌琼g~(ss)、三糖铁琼脂(TsI)、营 用三蒸水洗下，取150 L菌液于离心管中，100℃ 养琼脂以及20种抗生素药敏试验纸片、M．H肉汤 煮沸10 min后，12 000 r／min，离心10 min，取上清 和M．H琼脂均购自杭州微生物试剂有限公司。 液为DNA模板。 沙门菌属诊断血清 (A—F多价和59种因子血 PCR反应体系和条件：反应总体积25 L，其 清)购自中国生物技术集团公司兰州生物制品研 中10xPCR buffer 3~L；MgC12(25 mmol／L)2 L； 究所。 dNTPs(2．5 mol／L)4 ILL；弓I物P1、P2(5 I~mol／L)各 1．1．3 质控菌株 1．25 ILL；TaqDNA酶 (5 U／I~L)0．25 L；双蒸水