基于功能化纳米材料和微流芯片之生化分析新方式研究.docVIP

　　基于功能化纳米材料和微流芯片之生化分析新方式研究 第一章前言 生命科学是21世纪的中心学科，它的发展离不开分析测试技术，特别是分离和测试方法的创新。而分析测试技术的发展又将促进生命科学向更深层次发展。因此，生命过程中的分析测试技术已成为当今应用化学学科的重要前沿研究领域之一。随着生命科学的发展，许多新的分离、分析手段相继问世，并在生命科学研究中扮演着重要角色。其中，纳米生物传感技术和芯片电泳技术是众多分离、分析宇段中研究较多的两种。它们的发展对生命过程研究、疾病诊断、药物蹄选、药物代谢、基因分析、蛋白组学研究均具有重要意义。本章就纳米材料及芯片电泳在生化测试中的研究现状作简要概述。 1.1纳米材料在生化分析中的应用 1.1.1纳米材料的特征 纳米材料是指微观结构中至少有一维处于纳米尺度(1-100 nm)范围内的材料。常见的纳米材料包括金属、非金属、无机化合物和有机化合物等多种纳米范围的粉末材料。纳米材料由于尺寸很小使其表现出许多与常规材料显著不同的性质，具体包括： (1)小尺寸效应：是指物质随着尺寸变小而引起光、电、磁、热、化学活性和催化性等宏观物理性质的变化。纳米材料尺寸小，比表面积大，会表现出与常规材料显著不同的宏观物理性质，如对光的吸收增加，且产生吸收峰的等离子共振频移。 (2)表面效应：是指当物质处于纳米尺度时，其表面原子数、比表面积及表面能随着尺寸的变小而急剧增大后所引起的性质上的变化。由于表面原子处于裸露状态，具有高的表面能，使得其具有较高的活性，且极不稳定，它们很容易与其它原子结合，形成稳定结构。 (3)量子尺寸效应：纳米材料的能级间距随着尺寸的减小而增大，当能级间距大于热能、静电能、磁能、光子能量或超导态的凝聚能的平均能级间距时，纳米材料就会表现出与常规材料不同的反常特性。 (4)宏观量子險道效应：微颗粒子（其总能量小于势垄高度）穿越宏观系统的势垒而产生变化。正是由于纳米材料的独特性质，纳米材料已经被广泛应用于电子学、光学、化学、机械、生物学以及医药等领域。在生物化学分析方面，纳米材料也表现出相当广泛的应用前景，已在生物标记与成像、生物分离与富集、生物样品的超高灵敏分析、疾病诊断、药物的勒向传输等方面取得了显著的成效。 1.1.2几种重要的纳米材料在生化分析中的应用 1.1.2.1纳米金在生化分析中的应用 纳米金，亦称胶体金，是目前生化检测中应用最广泛的纳米材料之一。纳米金不仅制备容易、尺寸可控、粒径均一、性能稳定，而且具有良好的导电性和独特的光学性质。例如，纳米金在可见光区有较强的表面等离子体共振（SPR)吸收，并且吸收峰的位置和强度受其尺寸、形貌及颗粒之间距离的影响[1，2];又如纳米金具有很高的突光猝灭能力，而且覆盖波长范围很宽此外，纳米金还具有良好的生物相容性。纳米金可以与许多生物分子如DNA、蛋白质、多肽等进行共价或非共价结合，并能保持生物分子良好的生物活性，不影响它们与目标分子的结合。因此，用纳米金标记生物分子已成为目前最实用的标记技术之一。纳米金的这些优点和特性使其在生化检测领域的应用研究引起了广泛关注，并己成为一种极具应用潜力的分析工具。下面简要介绍基于纳米金的不同性质而发展起来的多种分析方法，主要包括比色检测法、焚光检测法、电化学检测法、生物条形码检测法、表面增强拉曼散射检测法等。 第二章基于纳米金增强焚光偏振的新型核酸内切酶生物传感器研究 2.1引言 核酸内切酶是一类重要的核酸酶，它能够水解核酸骨架中的隣酸二酷键，从而实现对核酸的切割。核酸内切酶在DNA复制、重组、修复、分型以及分子克隆中起着重要的作用[212-215]，已成为研究基因组成、功能及表达不可缺少的工具。核酸内切酶的应用促进了基因工程技术的迅速发展。同时，由于核酸内切酶对核酸的切割作用，它也为研究生物大分子蛋白质与核酸之间的相互作用提供了一种理想的模型。此外，核酸内切酶也是一类重要的药物祀点，可用于新药开发，特别是抗菌和抗滤过性病原体类药物的发现[216，217]。因此，检测核酸内切酶对于现代分子生物学研究和新药开发具有重要意义。检测核酸内切酶的传统方法主要有髙效液相色谱法、凝胶电泳法和酶联免疫分析法但这些方法存在操作复杂、分析时间长、灵敏度低等缺点。为了简化分析步骤和缩短分析时间，提高分析灵敏度，近年来研究者们发展了一些简便的分析方法用于核酸内切酶活性检测。如基于突光共振能量转移的核酸探针、基于阳离子突光聚合物的焚光传感器、基于DNAzyme的比色法以及基于金纳米粒子[228，检测法。这些方法具有简便、快速等优点，但由于缺乏有效的信号放大机制，其灵敏度仍较低。因此，有必要发展快速灵敏的新方法用于核酸内切酶的测定。本章以EcoRI酶为模型分析物，基于纳米金增强劳光偏振的原理，研制了一种简单且超灵敏检测核酸内切酶的新型生物传