弓形虫GRA3基因之原核表示及单克隆抗体制作与初步运用研究.docVIP

　　弓形虫GRA3基因之原核表示及单克隆抗体制作与初步运用研究 第一章绪论 弓形虫病是由刚地弓形虫引起的一种人畜共患疾病⑴。弓形虫在中医领域又叫三尸虫，是一种细胞内的寄生原虫，能够寄生于所有的有核细胞，并随血液循环流到全身各处，主要使大脑、心脏、眼底遭到损害，导致人体的免疫力下降，患上弓形虫病，同时也会引发多种疾病，可以导致严重的后果。发病甚广，呈世界性分布，各国发病率不一。弓形虫是一种机会性致病原虫，其中间宿主范围广，人类和多种脊椎动物都可以成为中间宿主。对于正常人群，感染弓形虫会引起慢性隐性感染；对于那些特殊人群，如AIDS患者、妊娠研究情况 从弓形虫的发现至今已九十多年，九十年前在地球的两半球几乎同时发现了弓形虫，因此也使得该病受到了广大专家学者的重视，特别是二战期间，使得弓形虫病(Toxoplasmosis)逐步为人们有所了解、认识和逐渐被人们所重视。我国.对弓形虫和弓形虫病的研究起步较晚，从五十年代中期开始对此病进行研究，五十年来取得了很大成绩。1900年Laveran对麻雀血液涂片观察时，观察到了一种寄生虫，与当前今弓形虫虫体相似；到了 1908年，在北非，法国的学者Nicolle和他的同事对在野生动物的研究观察的时候，结果在刚地梳祉鼠的肝脏还有脾脏中所分离提取的单核细胞中，观察到了一类与利什曼的寄生虫形态比较相似，将其命名为刚地利什曼原虫，随后对该寄生虫的形态、结构的研究显示，该病原体与利什曼原虫有不同之处，而是一种独立的寄生虫，直到1909年，根据其速殖子的形态有点点象弓箭的弓形，由于是从刚地梳址鼠体内发现的，所以给它命名为刚地弓形体(Toxoplasma gondii) -, 1910年-1939年世界各国学者相继从兔、顧歲、狗、鹤、驟鼠、松鼠、黄鼠、藤鼠、鸡等多种动物体的细胞内均发现了弓形虫的存在而且学者们根据其发现弓形虫的动物不同，都作了相应的命名，所以，在这段时间里，虽然在当时命名不同，但基本上都属于同一种。但是，到目前为止，学者们借助飞速发展的分子生物学的平台对不同地区、寄生于不同动物体内的弓形虫进行了详细的研究发现，这些弓形虫并不属于同一个种，其毒力的强弱也各部相同。世界公认的捷克医生1923年首先报告的一例患弓形虫病的11个月的婴儿，其右眼失明、左小脑畸变一斤小脑有积液，眼底黄斑部有病灶，经过病理检查的结果发现视网膜内有弓形虫包囊，这在某种程度上证明了，脑积水与弓形虫病原学有联系；1942年Olafson在对猫和绵羊的研究中，也发现了弓形虫病原体，随后1953年Sanger等在牛的体内也发现了弓形虫的存在；在我国解放前，我们并不了解该病，于恩庶教授于1954-1955年首先从猫、兔、猪、藤鼠、黄毛鼠等体内也法相了该病原体[+#39;]，通过国内外学者对该病的大量研究和重视，也为该病原体的更加深入的研究奠定了结实的基础。 经研究发现，弓形虫是一种具有双宿主生活史周期、双相发育的球虫，其生活史十分复杂，经过有性生殖和无性生殖两种方式，在终末宿圭?体猫及猫科动物_体内既发生有性生殖也发生无性生殖，有性生殖过程主要发生于猫及猫科动物的小肠的上皮细胞内，所以也称有性生殖为肠内期发育，因为在猫科动物体内也发生无性生殖，所以猫科动物也可作为弓形虫寄生的中间宿主。而在除猫科动物以外的所有动物及人体内仅进行无性生殖，无性生殖发生在其它组织或者有核细胞内，所以被称为肠外期发育弓形虫对中间宿主的选择范围是十分广泛的。在弓形虫生活周期中共发生5种阶段：分别是速殖子、组织包囊、裂殖体、配子体和卵囊，各个阶段都具有不同程度的感染性。速殖子(tachyzoite):又称滋养体，多呈卵圆形或新月形，宽、长约为4mmX8mm，经实验室检查可在哺乳动物除红细胞外几乎所有细胞中均可检查到，属于营养性细胞内寄生，在细胞外不能存活和增殖。主要多见于急性发病病例，如腹水中多见，速殖子阶段是主要的致病阶段，也是传染性最强的阶段；包囊（cyst):见于慢生病例的多种组织(脑组织的占包囊总数的57. 8%-6.4%)。包囊内虫体呈强阳性反应，弓形虫组织包囊可在任何器官中都可以检查到，但最多见于脑、心脏和骨髓肌。包囊形成与宿主的机体免疫力相关联，当宿主免疫力极其低下时，就会从包囊中释出慢殖子，释放出的慢殖子在侵入周围新的细胞，再度引起发病，冰冻溶解，加热(60r以上)均可破坏滋养体和组织包囊，干燥和正常胃分泌物（胃蛋白酶和盐酸)亦可使滋养体致死；卵囊(oocyst):多见于猫科动物小肠绒毛上皮细胞内；裂殖体(schizont)：见于终末宿主肠上皮细胞内；配子体(gametocyte)：见于终末宿主当摄入带有包囊、假囊或卵囊的食物后，滋养体会在胃肠道内释放出来，侵入肠黏膜细胞并在其中繁殖。终因虫体数大增而导致肠黏膜细胞破裂，滋养体经血流或淋巴播散并感