新鱼腥草素钠对鸡外周血T淋巴细胞增殖的影响.pdfVIP

动物医学进展。2008，29(2)：2l一23 Progress in Veterinary Medicine 新鱼腥草素钠对鸡外周血T淋巴细胞增殖的影响 李 萍 ，朱善元 ，成大荣。，陆广富 ，贾 宁 (1．甘肃农业大学，甘肃兰州 730070；2．江苏畜牧兽医职业技术学院，江苏泰州 225300； 3．扬州大学兽医学院．江苏扬州 225009) 摘 要：采集健康鸡肝素抗凝血，按常规方法分离外周血淋巴细胞并于体外培养24 h后，加入不同剂量 的新鱼腥草素钠／刀豆素A(ConA)，继续培养44 h后，以MTT法测定新鱼腥草素钠对淋巴细胞增殖的影 响。结果表明，新鱼腥草素钠在体外具有刺激淋巴细胞增殖的能力，且与ConA具有协同作用；进一步分析 表明，不同给药剂量的新鱼腥草素钠对淋巴细胞的影响不同，其中以终浓度为250 mg／L效果最明显。 关键词：新鱼腥草素钠；淋巴细胞；鸡 中图分类号：$859．79；$852．4 文献标识码：A 文章编号：1007-5038(2008)02—0021-03 新鱼腥草素钠(Sodium new houtluyfonate， 1．1．3 主要仪器 MCO—l5AC型CO2培养箱为日 SNH)是一种人工合成的鱼腥草素类似物，具有与 本SANYO公司产品，PM一6型倒置显微镜为日本 鱼腥草挥发油、合成鱼腥草素相似的药理作用，对提 Olympus公司产品，At一838型自动酶标分析仪为上 高机体的免疫力、感染性疾病的预防和治疗有着重 海安泰分析仪器有限公司产品，细胞培养板为美国 要意义[1]。目前，关于鱼腥草和合成鱼腥草素的报 Corning公司产品。 道，多集中在其广谱抗菌、抗病毒以及抗炎镇痛等作 1．2 方法 用的研究；关于其对家禽免疫功能的影响及在养禽 1．2．1外周血淋巴细胞的制备 取50日龄健康鸡 业中应用的，尚未见详细报道。本试验采用 MTT 购自江苏省家禽科学研究所，通过心脏采集肝素抗 法比较了不同浓度新鱼腥草素钠对体外培养的鸡外 凝血5 mL，制备淋巴细胞L2]。用含有100单位／mL 周血淋巴细胞增殖的影响作用，并筛选出效果最佳 青链霉素、100 mL／L新生牛血清的RPMI一1640培 的药物浓度，从而为后续体内试验确定药物剂量提 养液调整细胞密度至l×lO 个／mL后，转入细胞培 供参考依据，为探讨新鱼腥草素钠免疫增强作用和 养瓶并于39．5℃、体积分数为5 的CO。培养箱中 机理奠定基础。 培养24 h。 l 材料与方法 1．2．2 外周血淋巴细胞增殖反应 待上述细胞生 1．1 材料 长至单层后，去除培养上清，用等量的新鲜培养液悬 1．1．1 新鱼腥草素钠注射液 江苏动物药品工程 浮细胞，并分装于96孔细胞培养板中(80 I ／：fL)。 技术研究中心制备，规格10 mL(20 rag)。 按照表l加入不同剂量的新鱼腥草素钠／ConA(终 1．1．2 主要试剂 青霉素钠为哈药集团制药总厂 浓度5 mg／L)至总体积为200 L；同一剂量的试验 产品，硫酸链霉素为华北制药股份有限公司产品， 组共设置l2个重复孔，并设立不同的对照(表1) RPMI一1640培养液为Gibeo公司产品，新生牛血清 将细胞放入39．5℃、体积分数为5 的CO。培养箱 为杭州四季青生物材料有限公司产品，刀豆素 A 中继续培养44 h。取出细胞板，每孔加入2O L (concanavalin A，ConA)、噻唑蓝 (thiazolyl blue， MTT液(以RPMI一1640培养液配成5 g／L)；继续培 MTT)为Sigma公司分装产品，淋巴细胞分离液为 养4 h后，弃去培养孔中的上清液，每：fL~Jn入100 L 上海华精生物高科技有限公司产品，二甲基亚枫 DMSO，充分混匀；于室温避光静置15 rain后，测定 (dimethyl su