桑黄总 RNA提取方法研究.pdfVIP

浙江农业学报ActaAgriculturaeZhejiangensis，2014，26(1)：95-99 http：／／www．zjnyxb．en 郭彦萃 ，熊毅，张志．桑黄总RNA提取方法研究[J]．浙江农业学报 ，2014，26(1)：95—99 DOI：10．3969／j．issn．1004—1524．2014．01．17 桑黄总RNA提取方法研究 郭彦萃，熊 毅，张 志 (齐齐哈尔大学生命科学与农林学院，黑龙江 齐齐哈尔 161006) 摘 要：为探索适合桑黄总RNA的提取方法，以桑黄菌丝体为试验材料 ，比较了用Trizol法、CTAB法和RNA preppurePlantKit试剂盒法提取后总RNA的质量。结果表明，3种方法均能从桑黄菌丝体中提取分离到总 RNA，其中Tdz4法能提取到纯度较高、完整性较好的总 RNA，28S及 18S带型清晰无弥散，A60／A2。值为 1．96，RNA产率为604．64p-g·g～，提取的总 RNA适用于基因克隆与基因表达分析等分子生物学试验研究。 关键词：桑黄；RNA提取；Trizol法；RT—PCR 中图分类号：S646 文献标志码：A 文章编号：1004—1524(2014)01-0095-05 StudyonmethodsforRNA extractionfrom Phellinusbaumff GUO YAN—cui，XIONG Yi，ZHANG Zhi (CollegeofLifeScienceandAgricultureandForestry，QiqihaerUnivemity，Qiqihaer161006，China) Abstract：InordertoobtainanidealtotalRNAextractionmethodofPhellinusbaumii，totalRNA ofPhellinusbaumii wasextractedwith3methodsincludingTrizolmethod，CTABmethodandRNApreppurePlantKitmethod．There— suitsshowedthatallthesemethodscanextracttotalRNA from Phellinusbaumii，however，theTrizolmethodwasthe bestandhadhighintegrityandpurity．Thebandof28Sand18Swasclear．ThevalueofA26o／A280was1．96andthe RNA yieldwas604．64 g·g～．Thus，theRNA extractedbyTrizolmethodcouldbeusedforRT—PCR，genecloning andgeneexpressionandSOon． Keywords：PhellinusbaumiiPilat；RNA extraction；Trizolmethod；RT—PCR 桑黄 (PhellinusbaumiiPilat)又称桑耳、桑 注，具有十分广阔的研究与开发前景 。从分 臣，是多年生的珍稀药用真菌 J。我国古代就有 子生物学的角度来研究我国传统中药材已引起 桑黄药用价值的记载。 《神农本草经》描述为 “久 人们的高度重视，但桑黄分子生物学领域的研究 服轻身不老延年”；《中药大辞典》叙述可治内科 刚起步，高质量 RNA的获得是进行 Northern分 多种疾病，其子实体人药，味微苦，能利五脏宣肠 析、RT．PCR、cDNA文库构建及体外翻译等分子 气等。近年来 ，桑黄凭借其显著抑制肿瘤生长并 生物学研究的必要前提，是研究基因表达的重要 提高机体免疫能力的独特优势，已成为国际公认 环节。由于RNA不稳定、易降解，提取的RNA质 的生物抗癌领域中有效率最高的一种药用真菌， 量不好，在反转录时往往无法合成cDNA或是合 并迅速引起国内外医药界与保健行业