细胞内表达海洋来源之UPL1-AJL1-HdSABL基因抗肿瘤机制概述.docVIP

　　细胞内表达海洋来源之UPL1/AJL1/HdSABL基因抗肿瘤机制概述 1 引言 1.1癌症的研究概况及特征 现今癌症仍是威胁人类健康的主要疾病。在某些国家，癌症已超过心脑血管疾病成为人类的第一杀手，因此癌症的攻克与治愈一直是临床医生和肿瘤研究领域科学家们的最终目标。人们对肿瘤的研究中，提出了许多有关肿瘤形成的假说，肿瘤的发生与基因突变有关就是其中之一，认为肿瘤是一种遗传性疾病。David 等研究发现不同腺癌样本中都存在异常分裂，由此推测癌细胞中染色质内含物多少不同的主要原因是细胞分裂异常。20 世纪初，Theodor Boveri 设计了海胆卵实验，结果显示染色体异常和基因组不稳定是癌症发生的始动因素。癌症发生后，癌细胞表现出与正常细胞相异的生物学特性。2000 年 Douglas Hanahan和 RobertA. )的交互作用，配子受精，胚胎发育，细胞生长、分化、信号传递，细胞粘附、迁移、凋亡，免疫调节及炎症，寄主病原体的相互作用，糖蛋白折叠和维持细胞有丝分裂的感应和体内平衡等[10-13,19-28]。凝集素广泛分布在微生物、植物和动物中，并且与大多数的细胞过程有关，这些主要取决于它们可特异性地识别复杂的糖类物质。凝集素最早是在植物中分离出来的，随后几年陆续在微生物和动物体[27]内得到。Sharon和 Lis 等[27]观察得到不同动物凝集素的初级结构具有同源性且三级结构相似。研究动物凝集素的结构时发现大部分与碳水化合物结合的凝集素有特定的氨基酸残基，作为碳水化合物特异识别的结构域（CRD）。动物凝集素可以根据它们的亚细胞定位和所依赖的二价阳离子不同分类[14]。而根据其与糖识别结构域和特征的相似性，动物凝集素可以分为多种范畴：C-型凝集素，半乳糖凝集素，I-型凝集素，正五聚蛋白，p-型凝集素，tachylectins等[29]。例如，C-型凝集素结合甘露糖/半乳糖或类似的糖并有钙依赖性[30]，而半乳糖凝集素特异性识别半乳糖苷[31, 32]。 2 实验材料与方法 2.1 实验材料 （1）LB 培养基：称取酵母提取物 5 g，胰蛋白胨 10 g，NaCl 10 g，加入约 980 ml 双蒸水溶解混匀后用 10 mol/L NaOH 调 pH 至 7.5，用水定容至 1 L，121 ℃高压灭菌 20 min，常温保存备用。每 100 ml LB 液体培养基中加入 1.5 g 琼脂即可配置成固体 LB 培养基，121 ℃高压蒸汽灭菌 20 min，常温保存备用。 （2）PBS：称取 8 g NaCl，0.2 g KCl，0.24 g KH2PO4和 1.44 g Na2HPO4，800 ml 双蒸水溶解，pH 值调节至 7.4，补齐至 1 L，121 ℃高压蒸汽灭菌 20 min 后使用。 （3）TBS：称取 8 g NaCl， 0.2 g KCl，3.0 g Tris-base，800 ml 双蒸水溶解。pH 值调节至 7.4，双蒸水补齐至 1 L，121 ℃高压蒸汽灭菌 20 min 后使用。 （4）TBST：在上述 TBS 中加入 0.05%( V/V)Tl TBS 中。 （6）10%(l 双蒸水中。 （7）10%(l 双蒸水中。 （8）10电泳缓冲液：称取 30.3 g Tris-base，144 g 甘氨酸，10 g SDS，加约 800 ml双蒸水溶解，并定容至 1 L。 （9）10电转缓冲液：称取甘氨酸 29 g，Tris 58 g，SDS 3.7 g，加约 800 ml 双蒸水溶解，并定容至 1 L。 （10）1电泳缓冲液：量取 100 ml 10电泳缓冲液，加水定容至 1 L。 2.2 实验方法 （1）接种单克隆：在 5 ml LB 液体培养基中加入相应抗生素，用无菌镊子夹取无菌小枪头挑取适中单菌落，接种于上述 LB 液体培养基中，做好标记，37 ℃ 250 rpm 摇床培养10-15 h 或过夜。将菌液转移至 1.5-2 ml EP 管中，8000 rpm 离心 30 s，弃尽上清，根据菌体体积可重复一次。 （2）加入 200 mu;l 的 Solution I （4 ℃保存，且已加入 RNA 酶），用枪头吹打（切记换枪头）重悬菌体后用漩涡振荡器振荡，充分悬浮菌体。 （3）加入 200 mu;l 的 Solution II （用前检查是否澄清，若否，37 ℃水浴至澄清），上下轻轻颠倒混合数次（室温静置 2-5 min，切记不要超过 5 min）。 （4）加入 350 mu;l 的 Solution III（4 ℃保存），上下轻轻颠倒数次，室温静置 5 min 左右，12000 rpm 离心 5 min。 （5）将上述第 4 步中的上清转移至试剂盒中的 2 ml 收集管中（一次转移不能超过 75