离细胞法、酶学解离细胞法以及螯合剂解离细胞法。.PDFVIP

1. 从原代组织中分离细胞 将组织块分离（散）成细胞悬液的方法有多种，最常用的是机械解 离细胞法、酶学解离细胞法以及螯合剂解离细胞法。 从原代组织中获得单细胞悬液的一般方法是酶解聚。细胞暴露在酶中的时间要尽可能的短，以 保持最大的活性。下列步骤可以解聚整个组织，获得较高产量的有活性细胞。 （1）胰蛋白酶 (Trypsin) ●在去除不需要的组织后，使用无菌的解剖刀和剪子把剩余的组织切成3~4 mm 小片，通过悬浮 在无钙镁的平衡盐溶液中清洗组织碎片。让组织碎片沉淀，去除上清液。重复清洗2 到3 次。 ●将盛有组织碎片的容器置于冰上，去除残留的上清液。加入0.25%溶解在无钙镁的平衡盐溶液 中的胰蛋白酶（100 mg 组织加入1ml 胰蛋白酶）。 ●在4 ℃孵育6 到18 小时，使几乎没有胰蛋白酶活性的酶尽可能渗透进去。 ●移弃组织碎片中的胰蛋白酶，在37℃孵育包含残留胰蛋白酶的组织碎片20 到30 分钟。 ●在组织碎片加入热的完全培养基，用移液管轻轻地分散组织。如果使用无血清培养基，要加入 大豆胰蛋白酶抑制剂。 ●通过无菌不锈钢丝网（100～200 mm ）过滤，分散所有剩余组织。计数和接种细胞，进行培 养。 （2 ）胶原酶 (Collagenase