破囊壶菌△^4-脂肪酸脱饱和酶基因5’端侧翼区域的克隆与鉴定.pdfVIP

第24卷 第6期 福建师范大学学报 (自然科学版) Vo1．24 No．6 2008年 11月 JournalofFuiianNormalUniversity (NaturalScienceEdition) NOV．2008 文章编号：1000—5277(2008)06—0089—06 破囊壶菌△4一脂肪酸脱饱和酶基因5’端侧翼区域的克隆与鉴定 江贤章，陈金卿，田宝玉，高媛媛，舒正玉，李 欣，蓝灿华，黄建忠 (福建师范大学工业微生物教育部工程研究中心，福建 福州 350108) 摘要：应用衔接头PCR (LA—PCR)技术，扩增得到约1000bp的海洋破囊壶茵 一脱饱和酶基因5’端 侧翼区域的单一产物．对该产物测序，经启动子软件与序列比对分析，发现该序列 (Genkbank登录号 EU074209)具有真核启动子序列的基本结构特征，含有TATA盒、CAAT盒、INR等元件．将扩增得到的 脱饱和酶基因5’端侧翼序列亚克隆到含有绿色荧光蛋白 (GFP)报告基因的质粒pGlow—TOPO中，构建重 组表达质粒，转化大肠杆菌细胞．荧光显微观察大肠杆茵阳性转化予发出荧光，侧翼序列合有启动子功能得 到确认． 关键词：破囊壶茵；脱饱和酶；衔接头PCR；启动子；绿色荧光蛋白 中图分类号：Q78 文献标识码：A CloningandFunctionalAnalysisof5’FlankingRegionof △ 一DesaturaseGenefrom Thraustoch’trium JIANG Xian—zhang，CHEN Jin—qing，TIAN Bao—yu，GAO Yuan—yuan， SHU Zheng—yu，LIXin，LAN Can—hua，HUANG Jian—zhong (EngineeringResearchCenterofIndustrialMicrobiology，MinistryofEducation， FujianNormalUniversity，Fuzhou350108，China) Abstract：The5’flankingregionDNA encoding△一desaturasefrom Thraustochytrium sp．FJN一10withabout1000bpwasspeciallyamplifiedbyLA-PCR，whichwasclonedinto pMD一18T vectorandsequenced．Computationalanalysisresultsshowedthatthesequence (GenBankaccessionNo．EU074209)containedanovelpromoterregion with TATA box， CAAT boxandINR elements．Theamplifiedproductof5’flankingregionwasligatedinto thepGlow—TOPO vectorwhichcontainedthegreenfluorescenceprotein (GFP)geneasare— portergenetoconstructtheexpressionplasmid．Therec6mbinantplasmidwastransferred intotheEscherichiacoilTOP10．ManyE．coliTOP10with therecombinantplasmidcould emitfluorescence．Theresultindicatedthatthe5’flankingregionhadthepromotergeneseg— ment。whichcouldpromotetheexpressionofGFP geneinE．coliT0P10． Keywords：Thraustochytrium；desaturase；link—adapterPCR；promoter；greenfluore