基于同源建模和定点突变技术研究嗜热型l-阿拉伯糖异构酶 - 催化学报.pdf

See discussions, stats, and author profiles for this publication at: /publication/256766759 Probing the Essential Catalytic Residues and Substrate Affinity in Thermophilic L-Arabinose Isomerase by Homology Article in Chinese Journal of Catal sis · Jul 2012 DOI: 10.3724/SP.J.1088.2012.20606 CITATION READS 1 41 2 authors, including: Zheng Xu Nanjing Universit of Technolog 26 PUBLICATIONS 153 CITATIONS SEE PROFILE All content following this page was uploaded b Zheng Xu on 24 Jul 2017. The user has requested enhancement of the downloaded file. 2012 Chinese Journal of Catalysis Vol. 33 No. 10 文章编号: 0253-9837(2012)10-1717-07 DOI : 10.3724/SP.J.1088.2012.20606 研究论文: 1717–1723 基于同源建模和定点突变技术研究嗜热型L-阿拉伯糖异构酶 与D-半乳糖的亲和作用 * 李贵祥, 徐 铮, 李 莎, 徐 虹 南京工业大学食品与轻工学院材料化学工程国家重点实验室, 江苏南京 210009 摘要: 通过同源建模分析选取对Lactobacillus fermentum CGMCC2921 来源的L-阿拉伯糖异构酶 ( 简称L-AI 酶) 催化D-半乳糖 生产D-塔格糖起重要作用的氨基酸位点进行突变, 发现当 Q16, M311, K423 和 Q438 位点的氨基酸突变为丙氨酸时, 突变酶 Km 值降低, 其中突变酶 M311A 降至本体的 51.6%, 对D-半乳糖的转化率提高了 18.7%. 当 K423 位点的氨基酸残基分别突变 为丙氨酸、天冬酰胺或精氨酸时, 突变酶与底物的亲和力以及D-半乳糖的转化率随着 423 位点突变氨基酸侧链长度的增加而 降低. 运用计算机分子模拟技术分析表明, 当 M311 位点氨基酸突变为丙氨酸以后, 催化位点氨基酸残基与底物D-半乳糖之间 的氢键作用增强, 导致与底物亲和力增大, 从而提高了酶活力. 关键词: L-阿拉伯糖异构酶; D-塔格糖; 发酵乳杆菌; 同源建模; 定点突变 中图分类号: O643 文献标识码: A 收稿日期: 2012-06-06. 接受日期: 2012-07-26. *通讯联系人. 电话/传真: (025 电子信箱: xuh@ 基金来源: 国家高技术研究发展计划 (863 计划, 2012AA021503);