猪瘟病毒多表位基因的表达及其免疫原性分析.pdfVIP

畜牧兽医学报 ， （）： ２０１２４３２ ２７０２７４ 　 犃犮狋犪犞犲狋犲狉犻狀犪狉犻犪犲狋犣狅狅狋犲犮犺狀犻犮犪犛犻狀犻犮犪 猪瘟病毒多表位基因的表达及 其免疫原性分析 田 宏，侯相民，吴锦艳，陈 妍，尚佑军，刘湘涛 　 　 （中国农业科学院兰州兽医研究所 家畜疫病病原生物学国家重点实验室，兰州 ７３００４６） 摘 要：体外表达猪瘟病毒（ ） 、 细胞表位，并对表达产物的免疫原性进行分析。人工合成 的多个 ＣＦＳＶ ＴＢ ＣＦＳＶ 　 、 细胞表位及表位之间的连接 基因，并将该基因插入 表达载体，经酶切和测序鉴定获得重组 ＴＢ ｌｉｎｋｅｒ ｐＧＥＸ６Ｐ１ 阳性克隆，成功构建了 复合多表位抗原基因的原核表达质粒 ，转化 ， 诱导表 ＣＦＳＶ ｐＧＥＸＢＴ５００ 犈．犮狅犾犻ＢＬ２１ＩＰＴＧ 达，纯化表达产物并免疫兔。结果：通过 ＩＰＴＧ诱导 目的基因可高效表达，ＳＤＳＰＡＧＥ结果表明，以终浓度为 －１ · 的 进行诱导， 后表达量最高，产物分泌表达，相对分子质量约 ，表达产量约占菌体总 ０．９ｍｍｏｌ Ｌ ＩＰＴＧ ７ｈ ４３ｋｕ 蛋白的 。 检测表明，表达的融合蛋白能与猪瘟阳性血清发生特异性反应；兔攻毒试验表明所 ３０％ Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ 免疫表达产物可保护（根据发热反应评价）兔。结果表明表达获得的产物具有良好的反应原性，这为应用该融合蛋 白制备 ＣＳＦＶ免疫血清学诊断试剂和多表位疫苗研究奠定了基础。 关键词：猪瘟病毒；复合多表位抗原基因；融合表达；活性分析 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ） Ｓ８５２．６５１ Ａ ０３６６６９６４２０１２０２０２７００５ 　　　　 　　　　 犈狓狉犲狊狊犻狅狀狅犳犆狅犿 狅狌狀犱犕狌犾狋犻犲犻狋狅犲犌犲狀犲狅犳犆犾犪狊狊犻犮犪犾犛狑犻狀犲犉犲狏犲狉犞犻狉狌狊犻狀 狆 狆 狆 狆 犈．犮狅犾犻犪狀犱狋犺犲犃狊狊犲狊狊犿犲狀狋狅犳犐狋狊犐犿犿狌狀狅犾狅犻犮犻狋 犵 狔  ， ， ， ， ， ＴＩＡＮＨｏｎ ＨＯＵＸｉａｎｍｉｎ ＷＵＪｉｎａｎ ＣＨＥＮＹａｎ ＳＨＡＮＧＹｏｕｕｎ ＬＩＵＸｉａｎｔａｏ ｇ ｇ ｙ ｊ ｇ （ ， 犓犲犔犪犫狅狉犪狋狅狉 狅 犃狀犻犿犪犾犞犻狉狅犾狅 狅 犕犻狀犻狊狋狉 狅 犃 狉犻犮狌犾狋狌狉犲 犛狋犪狋犲犓犲犔犪犫狅