猪皮炎肾病综合征组织病理学和PCR诊断.pdfVIP

动物 医学进展。2008，29(11)：25—28 ProgressinVeterinaryM edicine 猪皮炎肾病综合征组织病理学和 PCR诊断 齐新永 ，张维谊 ，王 建，周锦萍，沈莉萍 (上海市动物疫病预防控制中心．上海 201103) 摘 要：应用病理学和 PCR方法，对浙江某猪场送检的疑似猪皮炎肾病综合征 (PDNS)病猪进行诊断。 结果发现 肾脏呈现纤维蛋 白性 肾小球 肾炎变化 ，真皮及皮下血管表现为坏死性脉管炎，淋巴组织中大量淋巴 细胞缺失、多核 巨细胞浸润，PCR扩增产物显示猪 圆环病毒 2型(PCV一2)阳性。结果表 明，该猪场感染了 PCV一2，并表现为 PDNS的病理特征。 关键词：猪皮炎肾病综合征；组织病理学；猪圆环病毒 2型；聚合酶链反应 中图分类号：$852．659．2 文献标识码 ：A 文章编号：1007—5038(2008)1l一0025—04 猪皮炎肾病综合征 (Procinedermatitisandne— 1．3 PCR检 测样 品 phropathysyndrome，PDNS)是与猪圆环病毒 2型 1．3．1 样 品前处理 取病猪肺脏、肝脏、脾脏 、肾脏 (PCV一2)感染相关 的一种新 的疾病 ，据报道，PDNS 和淋巴结，混样剪碎、研磨、PBS匀浆 ，7500r／min 的发生与PCV一2感染紧密联系在一起 。PCV一2最 离心 5min，取上清液备用。 早是 1996年 Clark等从加拿大的无特定病原 (SPF) 1．3．2 病毒 DNA 的提取 按核酸滤膜提取说明 猪中分离鉴定的，并认为是引起断奶后仔猪多系统 书进行，购 自香港基 因芯片有 限公司。取待检匀浆 衰竭综合征 (PMWS)的主要病原体Ll]。在英 国等 上清液 250,／L，加 500 LbufferV—A混匀 ，室温静 国家的PDNS发病猪群病死率在0．25 ～2O96／，甚 置 5min；力Ⅱl25 LbufferAP2，和 125 Lbuffer 至更高，死亡猪多呈急性肾衰竭，未死亡的病猪一般 V—B，颠倒混匀；12000r／min离心 5min，取 850肚L 在发病后 7d～10d康复 j。近年来我国对猪圆环 上清于装有柱子的2mL离心管中；5000r／rain离 病毒感染的报道较多，但大多为 PCV一2与其他疾病 心 l min，弃 废 液，加 700 L bufferWlA； 混合感染，而对猪皮炎肾病综合征的病例报道很少， 6000r／min离心 lmin，弃废液 ，加 700 Lbuffer 本试验对临床疑似 PDNS的l例病猪进行了病理学 W2漂洗液 ；12000r／rain离心 1rain，弃废液 ，加 观察和 PCR检测，现将结果报告如下。 700 LbufferW2漂洗液；12000r／min离心1min， l 材料与方法 将柱子套入一新 1．5mL管，加 4O LbufferTE；室 1．1 动物来源 温放置 1min，l2000r／min离心 1min；管中收集的 浙江某猪场饲养长 白肉猪 400余头，饲养至 即为提取的病毒 DNA，一20℃保存备用。 65kg左右时，lO头猪后肢 、会阴、胸 、腹和耳朵等部 1．3．3 猪圆环毒病的 PCR检测 酶及其他 PCR 位皮肤开始 出现圆形或不规则 的红色或紫红色斑 所需试剂购 自宝生物工程 (大连)有 限公司。设计特 块，有的坏死后形成结痂 ，病猪体温、食欲和精神状 异性引物 ，预扩增片段大小为 1154bp。上游引物 态变化不大。其中 1头死亡，被送到上海市动物疫 P1：5-CCG CGGGCTGGCTGAACTT一3；下游 引 病预防控制 中心诊断。 物 P2：5_『ACCCCCGCCACCGCTACC-3(引物由上 1．2 病理学观察 海鼎安生物有限公司合成)。PCR反应体系：10