一种增加毕赤酵母生产胰岛素前体的方法.PDFVIP

1178 生 物 工 程 学 报 梁晨晨 等/一种增加毕赤酵母生产胰岛素前体的方法 Chinese Journal of Biotechnology /cjbcn July 25, 2017, 33(7): 1178−1189 DOI: 10.13345/j.cjb.170012 ©2017 Chin J Biotech, All rights reserved ·生物技术与方法· 1,2 1,2 2 1 梁晨晨 ，王立 ，罗秋玲 ，吴静 1 江南大学 药学院，江苏 无锡 214122 2 江南大学 食品科学与技术国家重点实验室，江苏 无锡 214122 梁晨晨, 王立, 罗秋玲, 等 . 一种增加毕赤酵母生产胰岛素前体的方法 . 生物工程学报, 2017, 33(7): 1178–1189. Liang CC, Wang L, Luo QL, et al. A method to increase the production of insulin precursor in Pichia pastoris . Chin J Biotech, 2017, 33(7): 1178–1189. 摘 要: 为了提高胰岛素前体 (PI) 的产量，构建了pPIC9K-PI 表达载体并电转化至毕赤酵母菌株GS115 中， 在浓度为4.0 mg/mL 的G418 抗性平板上筛选到了 1 株拷贝数为 12 的菌株CL012 。将 SNAREs (可溶性N- 乙基 马来酰亚胺敏感因子受体蛋白) 组分中的 SNC2 和SNC2-SSO2 分别转入菌株CL012 中，并在摇瓶和5 L 发酵 罐水平上检测 SNAREs 对PI 产量的影响。结果表明：摇瓶水平上，甲醇诱导96 h 后，菌株CL012 的PI 产量 为 1.53 mg/L；表达SNC2 和SNC2-SSO2 的菌株的PI 产量分别为 1.89 mg/L 和2.21 mg/L ，分别比菌株CL012 提高了23.53%和44.44% 。在5 L 发酵罐上进行高密度发酵，甲醇诱导96 h 后菌株CL012 的PI 产量为53 mg/L ， 是摇瓶水平的34.64 倍；表达 SNC2 和SNC2-SSO2 的菌株的PI 产量分别达到64 mg/L 和78 mg/L ，分别比菌 株 CL012 提高了 20.75%和 47.17% 。由此得出结论 SNAREs 可以促进胰岛素前体的分泌，从而提高在毕赤酵 母中的异源表达。 : 毕赤酵母，胰岛素前体，SNAREs ，异源表达 Received: January 11, 2017; Accepted: March 24, 2017 Supported by: Key Technologies RD Program of Jiangsu Province (No. BE2014652), National Natural Science Foundation of China (No., Natural Science Foundation of Jiangsu Province (Nos. BE2015307, B. Corresponding author: Jing Wu. Tel: +86-510 E-mail: wujing@ 江苏省科技支撑计划社会发展项目 (No. BE2014652) ，国家自然科学基金 (No. ，江苏省自然科学基金 (Nos. BE2015307,