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蛋白质银染原理与方法 2009-04-28 16:38:24 来源:未知 【大 中 小】 评论: 条 - 摘要： 蛋白质条带的银染是基于蛋白质中各种基团（如琉基、碳基等）与银的结合，检测极限是 2～5.0ng／蛋白条带。 原理：蛋白质条带的银染是基于蛋白质中各种基团（如琉基、碳基等）与银的结合，检测极限是 2～5.0ng／蛋白条带。 ① SDS电泳。注意：银染检测蛋白质的水平是在100ng左右，与Commassie Blue染色比较，银染加样量要少。否则难以得到清晰的电泳分辨率。 ② 电泳结束后，戴手套将PAGE胶转移到干净的玻璃培养皿或TIP头盒盖中。加入25ml Fixing Solution（固定液），室温振荡保温30min。胶需要完全淹没在固定液中。 ③ 彻底弃去固定液，加入25ml Incubation Solution（保育液），室温振荡保温30min。胶需要完全淹没在保育液中。 ④ 彻底弃去Incubation Solution（保育液），用50ml去离子水洗3次，每次5min。 ⑤ 准备：取2.5ml 10X Silvering Solution, 加入22.5mL水，混匀后使用。 ⑥ 弃去洗涤的水，加入25ml Silvering Solution (银染液)。室温振荡保温20min。 ⑦ 彻底弃去银染液，加入25mL Developing Solution（显色液），室温振荡保温1~10min。注意观察目的条带。如果目的条带出现了，可以考虑终止显色。显色时间不要过长，否则本底较深。 ⑧ 彻底弃去显色液, 加入25mLStopping Solution（终止液），室温振荡保温10min。 ⑨ 彻底弃去Stopping Solution（终止液），用50mL去离子水洗3次，每次5min。 弃去洗涤的水，加入25mL Preserving Solution（保护液），室温振荡保温20min。银染PAGE胶可以拍照保存，也可以室温玻璃纸干燥。 今天第一次银染，结果出来啥也没有，凝胶就像一块海带一样。能不能提供详细的银染步骤呢？好像有好几种版本，哪位大侠有经验的希望能点拨一下？ hotstoe wrote: 1. 取下凝胶,蒸馏水冼胶30秒. 2. 0.1% 硝酸银染色10分钟. 3. 弃去染色液,蒸馏水洗胶1分钟. 4.显色液显色15秒,换用新