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出口食品平板菌落计数 Plate count for bacterial colonies in food for export SN 0168— 92 代替ZB X09001-— 86 1 主题内容与适用范围 本标准规定了出口食品平板菌落计数的方法。 本标准适用于各种出口食品及其原料，有专门规定检验方法的除外。 2 设备和材料 2.1 工作台：超净工作台或放于清洁、光线充足的实验室里的水平工作台。琼脂平板在工作台上暴露15min，每平板不得超过15个菌落。 2.2 恒温培养箱：36± l℃。 2.3 恒温水浴箱：45± l℃。 2.4 均质器。 2.5 振荡器。 2.6 吸管：1、10和25mL，具0.1 mL刻度。 2.7平皿：直径为90mm。 2.8 稀释瓶：广口瓶或三角烧瓶，容量为200mL和500mL。 2.9 玻璃珠：直径为5mm左右。 2.10 天平：感量0.1g。 3 培养基和试剂 3.1 平板计数琼脂。 3.2 75％乙醇。 3.3 稀释剂：磷酸盐缓冲稀释液。 4 操作程序 4.1 样品制备 4.1.1 以无菌操作取有代表性的样品盛于灭菌容器内。如有包装，则用75％乙醇在包装开口处擦拭后取样。 4.1.2 制备样品匀液 固体或半固体食品：以无菌操作取25g样品，放入装有225mL稀释剂的灭菌均质杯内，于8 000r ／min均质1～2min，制成1：10的样品匀液。 如样品均质时间超过2min，应在均质杯外加冰水冷却。 干燥或干粉食品：以无菌操作取25g样品，放入装有225mL稀释剂和适量玻璃珠的500mL稀释瓶中。迅速振摇，将样品混匀，制成1：10的样品 匀液。振摇时，幅度为30cm，7s内振摇25次，也可用机械振荡器振荡15s代替手摇。 4.1 2.3 液体食品：用灭菌吸管吸取25 mL样品，放入装有225 mL稀释剂的500mL稀释瓶中，按条中所述方法迅速振摇，制成1：10的样品匀 液；吸取样品时，吸管插入液面下不要超过2.5 cm。吸管内液体要在2～4s内完全排入稀释剂中。不要在稀释剂中吹洗吸管。 4.2 稀释样品匀液 4.2.1 用10mL灭菌吸管准确吸取1：10的样品匀液10mL，放入装有90mL稀释剂的200mL稀释瓶中。按条中所述的方法，迅速振摇。制成1：100 的样品液。从容器中吸取样品匀液和以后的稀释操作中，吸管尖不要碰着瓶口。吸入的液体应先高于所要求的刻度，然后提起吸管使其尖端离开液面 并贴在容器内壁将液体调至所要求的刻度。 中国仪器之家 / -3 -4 -5 4.2.2 分别用10 mL灭菌吸管按4.2.1条所述方法将样品匀液制成10倍递增稀释的样品液，如10 、10 、10 … … 。 4.3 平板接种 4.3.1 对于每一个样品，选用合适的三个连续稀释度的样品液进行平板计数。 4.3.2 分别用灭菌吸管吸取lmL样品液放入作了适宜标志的平皿内。每个稀释度的样品液用两个平皿。如果某一样品液在取出供试部分前的放置时间 超过3min，应按条所述方法再振摇该样品液。 4.3.3 分别加12～15mL平板计数琼脂(已放45+1℃的水浴中恒温)到各平皿内。立即将平皿内的样品液和琼脂培养基充分混合。混合方法是将平皿倾斜 和旋转。要防止把混合物溅到平皿壁和盖上。同时将平板计数琼脂倾入加有1mL稀释剂的另一灭菌平皿作空白对照。将样品液加入平皿后应立即倾注 琼脂培养基，每个样品从开始稀释到倾注最后一个平皿所用的时间不得超过20min。 4.4 培养 待琼脂凝固后将平皿翻转，立即放进36± 1℃的恒温培养箱内培养48± 2h。培养箱应保持一定的湿度，经48h培养的琼脂培养基的失重不得超过15％。 4.5 菌落计数和记录 4.5.1 培养后，立即计数每个