反相高效液相色谱法分离中华绒螯蟹性腺抑制激素的初步研究.pdfVIP

维普资讯 第 14卷第2期 中 国 水 产 科 学 V01．14 No．2 2007年 3月 JournalofFisherySciencesofChina March 2007 反相高效液相色谱法分离中华绒螯蟹性腺抑制激素的初步研究 马奎，康现江，穆淑梅，张亮，温秀荣 (河北大学 生命科学学院，河北 保定071002) 摘要：采用反相高效液相色谱层析法 (RP—HPLC)分离中华绒螯蟹 (Eriocht4rsinensis)眼柄视上神经节中的性腺抑制激 素 ，收集在高血糖激素家族区域内出峰的洗脱液组分，得到7组单一的样品组分。通过活体注射的方法，观察和统计每 一 组分对去眼柄中华绒螯蟹卵母细胞直径大小的影响，以检验每个分离组分的性腺抑制活性。结果发现，其中的第 7组 分对中华绒螯蟹的卵巢发育具有最强的抑制作用，推测这一组分为中华绒螯蟹的性腺抑制激素。[中国水产科学，2007， 14(2)：331—335] 关键词：中华绒螯蟹；性腺抑制激素；反相高效液相色谱；卵母细胞 中图分类号：Q959．223 文献标识码：A 文章编号：1005—8737一(2007)02—0331—05 x器官一窦腺复合体 (Xorgan-sinusglnadsystem， 养殖动物，在中国地理分布较广[2oJ，但在各地养殖 XoSG)位于甲壳动物眼柄视上神经节，是甲壳动物 过程中普遍发生一龄蟹性早熟现象。性早熟直接导 的重要神经内分泌器官。XO-SG合成和分泌的甲壳 致了河蟹生长缓慢甚至停滞、个体小、死亡率高，从 动物高血糖激素 (Cmstammhyperglycemichormone， 而给经济生产带来了巨大的损失[21J。导致河蟹性 0 H)、蜕皮抑制激素(Molt-inhibitinghorrmne，MIH)、 早熟发生的机制非常复杂，通常认为是外在因素和 性腺抑制激素(Gonad-inhibitinghorrmne，Gn4)和大颚 内在因素综合作用的结果。其中河蟹的生殖内分泌 器官抑制激素 (Mandibularorgna-inhibiting horrmne， 调控被认为是导致河蟹性早熟的主要 内在因素[22]， M0I}{)等多种神经多肽类激素。这些激素同属于 而 GIH的分泌和代谢失调与性早熟有着密切 的关 CHH家族，它们的成熟肽都由71--78个氨基酸残基 系。GIH是一种具有酸性等 电点的热稳定性产物， 组成，并具有相似的氨基酸序列，有 6个位置保守的 它不仅能够抑制雌体的卵黄发生及性腺刺激因子的 半胱氨酸，形成 3个链内二硫键 【卜5l。 生成 ，还能抑制雄体的促雄性腺的活性以及肝胰腺 合成卵黄蛋 白及大颚器合成 甲基法尼醇[23]。由于 近年来对甲壳动物激素的研究已经成为国内外 在河蟹眼柄 中神经多肽激素的合成很少，GIH在 相关研究的热点 J。国外对 甲壳动物所特有的高血 XO-SG中的含量甚微，给分离、纯化工作造成了困 糖素家族神经激素尤其是CHH和MI}{，在分子水平 难。本研究采取高效液相色谱法对河蟹眼柄的粗提 上进行 了深入 的研究，积 累了大量的基础性资 液进行分离，并将分离所得到的组分注射到去眼柄 料 -1。国内有关甲壳动物眼柄神经内分泌系统的 的河蟹体内，通过观察其对卵巢发育的影响，检验其 研究还停留在对甲壳动物眼柄神经内分泌系统的组 生物学活性，旨为进一步研究河蟹GIH 的特征及其 织学和细胞学观察[-1引。在生物化学和分子生物