二甲苯致小鼠角膜损伤以及角膜染色体损伤探究.docVIP

二甲苯致小鼠角膜损伤以及角膜染色体损伤探究【摘要】 将二甲苯分别滴入四个实验组的小鼠眼内，每只眼两滴，固定30 min。加入60%的冰醋酸水溶液2～3滴软化角膜0．5～1 min。离心，滴片，晾干，Giemsa染色，在显微镜下观察并照相。染色体制片上可见到染毒后角膜细胞分裂增殖活跃，分裂相明显增多。在50%二甲苯染毒组的染色体制片中，可观察到染色体粘连现象及染色单体裂隙。 【关键词】 二甲苯;角膜损伤 苯的同系物二甲苯，是一种有毒的挥发性液体。它除了对呼吸，消化系统具有不良作用外，还对皮肤、黏膜以及角膜和结膜都具有刺激或损伤作用。 角膜是眼睛的重要组成部分，是重要的屈光间质之一。由于角膜位于眼的最前部，并且暴露于外界，故最易受到外界因素的影响而致损伤。所以，本文以小鼠角膜作为材料，用不同浓度的二甲苯稀释液予以作用，以观察苯的同系物二甲苯对角膜的刺激和损伤作用。 1 材料与方法 二甲苯，分析纯，由济南化学试剂厂提供。 实验动物：纯种BALB/C小鼠，质量18～22 g，雌雄各半实验前自行喂养7 d。 1．1 二甲苯滴眼 小鼠50只，随机分成五组，每组10只。将二甲苯用液体石蜡稀释，配成5%、10%、20%和50%四种浓度，分别滴入四个实验组的小鼠眼内，每只眼两滴，对照组只滴入同等剂量的液体石蜡。24 h后各自再加两滴。 1．2 取材及小鼠角膜染色体标本的制备 在第二次滴眼的同时，给每只小鼠腹腔注射10 mg的秋水仙素0．4 ml,4 h后，以颈椎脱臼法处死小鼠，迅速摘出眼球。 眼球置于生理盐水中洗去血污，移入0．075M氯化钾低渗液中，取下完整角膜，放入新鲜低渗液中，于37℃温箱中低渗20 min。吸取低渗液，加入新鲜配制的甲醇冰醋酸(3∶1)固定液，固定30 min。 弃去固定液，加入60%的冰醋酸水溶液2～3滴软化角膜0．5～1 min(软化液用量略多于待软化的角膜体积，并需要严格控制软化时间)。同时用眼科镊子轻轻挤压角膜，使单个细胞分离出来。随即加入固定液并弃去残渣，用吸管轻轻吹打片刻，使细胞均匀分散在固定液中。静置10～20 min，然后离心10 min(1 000 r/min)。重复固定一次，保留少量固定液制成细胞悬液。取预冷的玻片滴片，晾干，Giemsa染色，冲洗，晾干，在显微镜下观察并照相。 2 结果 2．1 角膜刺激作用及角膜损伤的观察 用二甲苯作用于小鼠眼睛后，可见小鼠出现频频搔抓眼部，用头摩擦地面，在鼠笼里四处乱窜等极其烦躁不安的表现，二甲苯浓度越高，症状越明显，烦躁痛苦的表现越严重。二甲苯作用24 h后，50%浓度组可见小鼠眼周围部位红肿，结膜充血，部分小鼠可见眼角膜表面有浅表的小溃疡。 2．2 二甲苯对小鼠角膜染色体影响的分析 染色体制片上 可见到染毒后角膜细胞分裂增殖活跃，分裂相明显增多。 在对照组和5%、10%、20%染毒组的染色体制片中，未见到染色体畸变。在50%二甲苯染毒组的染色体制片中，可观察到染色体粘连现象(图2)。粘连数为6%(计数100个分裂相)。个别分裂相出现染色单体裂隙(图3)，其他类型的染色体畸变不明显。 3 讨论及总结 苯类化学物质毒性的致病机理，有人认为与其脂溶性及其代谢产物酚类有关。二甲苯虽属于低毒性物质，其毒性作用主要是局部刺激作用以及对神经系统的麻醉作用。但二甲苯接触到眼角膜可引起角膜灼伤，角膜上皮剥脱。较高浓度的二甲苯可引起泡性角膜炎。本实验中，观察到了小鼠角膜的浅表溃疡。显微镜下于50%浓度组中观察到染色体粘连现象以及染色单体裂隙，也说明了高浓度二甲苯对角膜灼伤严重和对染色体的损伤，与文献报道基本是一致的。 眼角膜在组织学上由表向里分为五层。最表面的两层为上皮组织层和前弹力层。角膜上皮层的细胞再生能力强，而其下的前弹力层再生能力较弱。当角膜受理化因素影响致上皮层受损伤后，上皮细胞分裂增殖，很快即可有新生的上皮细胞覆盖受伤区。故角膜受创伤后的愈合过程是由上皮细胞的分裂增殖来修复的。本实验也观察到小鼠角膜受二甲苯灼伤导致上皮细胞剥脱后，残留细胞分裂增殖活跃，以完成修复功能。如果损伤严重以至于到达前弹力层，则细胞很难再生，就可导致永久性的损害。以及遗传物质的损害。那样的后果将是非常严重，无法补救的。 因此从事长期与二甲苯接触的工作人员，对自身皮肤和眼睛的防护是十分必要和需要重视的。 参考文献 1 颜士勇，等.二甲苯对原代培养神经细胞毒性的实验研究.海军医学杂志，2002，9，23(3). 2 张君娜,等.二甲苯的毒性与在病理科应用中的防护.适宜诊疗技术，2003，21(4)：18. 1