检测乙型肝炎表面抗原一步法试剂钩状效应研究.docVIP

检测乙型肝炎表面抗原一步法试剂钩状效应研究[摘要]目的:探讨一步法试剂的钩状效应（HOOK）在乙肝病毒表面抗原（HBsAg）检测的漏检情况和二步法的临床应用价值。方法:对乙肝病毒e抗原（HBeAg）和乙肝病毒核心抗体（HbcAb）两项阳性，而HBsAg阴性的血清标本进行不同比例稀释，分别用一步法和二步法进行检测和比较。结果:在10份HBeAg和HBcAb两项阳性的血清样品中，二步法检测8份HBsAg阳性，而一步法在不同稀释度时，则检出不同的结果。结论:用一步法检测会因HOOK出现假阴性导致漏检，建议检测乙肝表面抗原用二步法替代一步法。 [关键词] 双抗体夹心双位点一步法；钩状效应；二步法；乙肝病毒表面抗原 目前，国内检测乙肝病毒表面抗原（HBsAg）绝大多数采用酶联免疫吸附测定（ELISA）中的双抗体夹心双位点一步法。用该方法检测HBsAg，当标本中的HBsAg浓度过高时，会因钩状效应（HOOK）现象出现假阴性[1]，而造成漏检。乙肝病毒e抗原（HBeAg）和乙肝病毒核心抗体（HBcAb）两项阳性时，大多数HBsAg都为阳性，但HBsAg阴性也可能存在漏检问题。为此，我们将对HBeAg和HBcAb两项阳性的血清标本进行不同比例稀释后，再用一步法和二步法进行分别检测和比较，以探讨一步法试剂的HOOK在HBsAg检测的漏检情况和二步法的临床应用意义及价值。 1 材料和方法 1.1 材料 1.1.1 标本来源 收集本院一步法检测乙型肝炎二对半患者血清480份获得HBsAg阴性[样品吸光度/临界值（S/Co）＜1.0]。而HBeAg和HBcAb两项阳性的血清10份。 1.1.2 仪器与试剂 Labsystem Denley Dragon MK2型酶标仪，SLT洗板机，上海实业科华生物工程有限公司提供的HBsAg试剂盒。 1.2 方法 1.2.1 样品处理 先用生理盐水将10份血清标本进行倍比稀释至1∶2 048，再分别进行一步法和二步法检测。 1.2.2 检测 一步法检测严格按试剂盒说明书进行，二步法检测是用一步法试剂分两步进行。第一步加标本血清后，37℃温浴30 min，洗板后加酶标抗体，再37℃温浴30 min洗板，然后加底物显色。 2 结果 在10份HBeAg和HBcAb两项阳性的血清样品中，二步法检测8份HBsAg阳性，而一步法在不同稀释度时，则检出不同的结果，见表1。 2份血清二种方法的各稀释度检测HBsAg均为阴性。8份血清S/CO值在一步法、二步法中的变化不同。 3 讨论 用ELISA一步法试剂盒检测HBsAg虽具有简便、快速、省时等优点，但如标本中HBsAg含量很高时，标本中HBsAg分别与酶标抗体和固相抗体形成免疫复合物，不形成夹心复合物，而产生钩状效应。此效应严重时，反应甚至可不显色而出现假阴性结果[2]。而在二步法检测中，高浓度的HBsAg只与包被的固相HBsAb“饱和”性结合，形成抗原抗体复合物，多余的未结合的游离HBsAg被第一次洗板时洗掉，随后加入的酶结合抗原则能通过并与抗原-抗体复合物上的HBsAg结合，形成酶标抗体-抗原-固相抗体的双抗体夹心复合物，加入底物后显色，呈现阳性结果而不被漏检。至于2份HBeAg和HBcAb阳性，一步法、二步法各稀释度HBsAg均为阴性，可能这种病人属于裸核酸感染或表面抗原不表达或检测试剂的灵敏度不够相关，但有待进一步研究确定。 试剂盒检测HBsAg的浓度与板条包被的HBsAb量和酶结合HBsAb的量有关。有专家提出，用高亲和力的单克隆抗体制备此类试剂可削弱HOOK。通常解决这类漏检问题的办法是：①采用二步法检测HBsAg。②不仅单纯检测HBsAg，而且同时加HBcAb[3]或二对半检测。③测定HBsAg加HBeAg，HBeAg单纯阳性时，对样本作一定稀释后再测HBsAg。但是，我们认为最简便实用的方法是二步法。 经输血传播乙型肝炎是国内外输血专家非常关注的问题。目前国内采血机构对供血者健康检查化验标准HBV的筛查都仅要求HBsAg阴性（试剂灵敏度≤1 ng/ml）[4]，其检测方法基本为一步法。理论和实践都说明，双抗体夹心双位点一步法检测HBsAg确实存在因浓度过高而出现假阴性的漏检问题。因此，为了受血者的安全，提高血液质量，我们建议对献血者应取消一步法，改用二步法进行HBsAg检测。 参考文献 [1] 杨振修.钩状效应与免疫学检查[J].上海医学检验杂志,1994,9(2):111-112. [2] 郑怀竞,韩松.临床检验ELISA指南[M].北京:北京医科大学,中国协和医科大学联合出版社,1994.14. [3] 郑怀竞.临床免