生化试剂对胆汁酸测定交叉污染及防范措施.docVIP

生化试剂对胆汁酸测定交叉污染及防范措施【摘要】 目的 探讨生化试剂对胆汁酸(TBA)测定的交叉污染及防范措施。方法 ①采用放大的方法，将总胆汁酸作为观察项目，其他常规生化项目ALT、CREA、GGT、AST、TP、UA、ALB、TBIL、DBIL、TG、CHOL、HDL、BUN、APOA、APOB、GLU、FRUC作为干扰项目，筛查并确认对总胆汁酸测定有明显干扰的项目；②设定特殊清洗程序来降低干扰。结果 本实验发现尿酸、三酰甘油、总胆固醇对总胆汁酸测定有明显的正干扰。设置加强水冲洗试剂针程序可有效的去除尿酸的干扰；设置在总胆汁酸项目加试剂前对仪器固定比色杯自动清洗后再进行特殊清洗,可消除因试剂携带污染对总汁酸测定的干扰。结论 全自动生化分析仪测定总胆汁酸存在项目间的交叉污染，设置特殊清洗方式可有效地消除因试剂携带污染对TBA测定的干扰。 【关键词】生化试剂；胆汁酸；总胆固醇；交叉污染 全自动生化分析仪具有微量、快速、多项、准确、重复性好等特点。随着全自动生化分析仪的广泛应用，其测定过程中存在的交叉污染问题也受到关注。在检测标本中的总胆酸的含量时，通过调整项目通道后仍发现胆汁酸单项特别高，在复查时结果又正常的现象。胆汁酸在肝胆疾病、新生儿黄疸、孕妇肝内胆汁淤积症、冠心病等方面都是及其重要的检测指标[1]。所以，笔者就胆汁酸结果的不稳定性及防范措施进行实验室观察，现报告如下。 1 材料 1．1 仪器与试剂 日立7170型全自动生化分析仪。ALT、CREA、GGT、AST、TP、UA、ALB、TG、CHOL、GLU、FRUC由上海合富公司提供。APOA、APOB上海北加公司提供，TBIL、DBIL由上海利德曼公司提供，TBA由烟台奥斯邦公司提供。 1．2 混合血清采用Randox公司的质控血清。 1．3 清洗液 日立公司的碱性清洗液HIALKAU-D。 2 方法 2．1 胆汁酸检测原理如图1。 2．2 可疑项目的筛查 将常规生化项目ALT、CREA、GGT、AST、TP、UA、ALB、TBIL、DBIL、TG、CHOL、HDL、BUN、 APOA、APOB、GLU、FRUC及蒸馏水作为待测样本来测定总胆汁酸，筛查出对TBA有明显干扰的项目。 2．3 可疑项目的确认 将混合血清连续测定10次TBA,计算其均值和标准差。取均值作为相应项目的靶值取均值，然后再按如下顺序测定;如先测GGT再测TP，即反映GGT试剂对TP测定的影响，如此反复10次。计算其均值和标准差，与相应的靶值比较。其他组合也同样按照上述方法进行，然后做统计学分析。 2．4 交叉污染的排除 2．4．1 设定蒸馏水加强冲洗程序 在日立生化仪上设置清除试剂间交叉干扰的程序，在试剂针从施干扰项转向TBA项目时再对试剂针用蒸馏水加强冲洗1次。重复2．3操作，观察交叉污染是否依然存在。 2．4．2 设定比色杯清洗程序 将用加强蒸馏水清洗后交叉污染依然存在的组合列出，在测定完某个对另一个项目将造成污染的项目后，在特殊清洗程序中设定试剂针1、试剂针2分别向该使用过的杯子注入清洗剂的程序。重复2．3操作，观察交叉污染是否依然存在。 2．4．3 统计分析 使用SPSSS10．0统计软件，测定值与靶值组进行配对样本t检验，P0．05)。但总胆固醇和三酰甘油对总胆汁酸的污染依然存在(见表3)。 3．4 设定固定比色杯清洗程序后。各组合的交叉污染基本排除。测定值组与靶值组比较，结果差异无统计学意义(P0．05)(见表4)。 3 讨论 胆汁酸是由肝脏分解代谢的，能反映肝实质损伤。所以胆汁酸的结果影响到疾病的诊断治疗和预后。本实验室采用循环酶法测定胆汁酸的含量，通过不断的循环使微量的胆汁酸信号被扩增(图1)，扩增的量决定于循环次数，这种方法不但可以提高检测的灵敏度，而且也大大减少了共存物质的干扰。 多通道生化分析仪的试剂加样机构需接触各种试剂成分，因此当试剂针、搅拌针和固定比色杯清洗不完全或清洗液的效率低时，残留试剂或反应产物污染试剂针、搅拌针和固定比色杯，从而会可能导致相邻检测项目结果的不稳定性。 胆汁酸结果的不稳定性，荟萃资料表明,有3个主要原因:第一，试剂成分中含有某种被污染的项目；第二，试剂中含有下一个测试所要测定底物或含有的某种试剂成分，与下一反应所测定的底物有作用，因而直接影响下一反应测定的结果；第三，该试剂所引导的反应给下一个项目反应进程带来了间接干扰[2,3]。由上述实验数据我们发现，从筛查污染项目到干扰排除整个过程中，胆汁酸结果的异常偏高正是因为携带污染造成的，而尿酸对胆汁酸的正干扰最大，总胆固醇和三酰甘油次之。从试剂成分来看，总胆固醇和三酰甘油试剂中均含有胆酸钠、4-氯酚: