脑低灌注触发脑内tau过度磷酸化及胆碱能神经损害.docVIP

脑低灌注触发脑内tau过度磷酸化及胆碱能神经损害[摘要]目的探讨脑低灌注对脑内tau蛋白的过度磷酸化和胆碱能指标变化的影响。方法40只SD大鼠随机分为低灌注组和假手术组，永久性阻断双侧颈总动脉制作脑低灌注模型；应用Y迷宫检测大鼠学习记忆能力，用免疫组化法检测大脑皮质和海马组织色氨酸404位点tau蛋白过度磷酸化(Pser404-Tau)和胆碱乙酰转移酶(ChAT)的表达，用考马斯亮蓝法检测海马组织乙酰胆碱酯酶(AChE)活性。结果脑低灌注术后14d和21d，大鼠学习记忆能力明显减退，与假手术组相比差异有统计学意义(P0.05)，术后14d和21d测试2组差异有统计学意义(P0.01)。见表1。 2．2 大脑皮质、海马Pser404-Tau和ChAT表达 免疫组化染色显示假手术组大脑皮质和海马可见少量Pser404-Tau阳性表达；低灌注组大脑皮质及海马可观察到大量Pser404-Tau阳性细胞，胞浆、轴突呈棕黄色，着色明显。ChAT免疫组化染色显示，假手术组神经元表达阳性，细胞浆呈棕黄色，分布较均匀，细胞核不着色，低灌注组ChAT阳性细胞数大量减少。Ps-er404-Tau和ChAT阳性细胞计数见表2。 2．3 海马AChE活性 结果见表2，低灌注组海马AChE活性明显降低，与假手术组比较，差异有统计学意义(P0.01)。 3 讨论 AD是由德国病理学家Alois Alzheimer于1907年 首先报道的一种神经系统变性疾病，其主要病理特征是老年斑(sPs)出现、神经原纤维缠结(NFT)和神经元的大量丢失。AD脑内神经元的丢失以胆碱能神经元为主，主要表现为记忆障碍、认知功能减退等胆碱能神经受损所致的高级神经功能紊乱。而AD病因和发病机制迄今尚无统一的认识，近年研究认为血管因素主导AD的发病，甚至认为AD本身就是一种有着神经元变性结果的血管源性疾病。本实验结果显示，脑低灌注术后脑组织发生了与AD相关的病理生理改变，即tau蛋白过度磷酸化，中枢胆碱能系统功能紊乱，认知功能下降。 3．1 脑低灌注触发脑组织AD样改变 临床流行病学研究显示，散发性AD患者多同时伴发脑血管疾病，AD患者早在出现痴呆症状之前，就已有明显的脑灌注不足及脑代谢降低，AD发病的危险因素可以阻碍脑部供血，而改善脑血液循环的药物多能够减轻AD症状，所有这些均提示AD的发病与脑缺血相关。近来更有实验研究显示，局灶性短暂性脑缺血后，脑组织卢淀粉样蛋白和JB淀粉样前体蛋白表达增加，9个月后生成了SPS，提供了脑缺血引发AD的直接证据。本实验中2VO模型鼠双侧颈总动脉被阻断，脑组织处于持续性低灌注状态，大脑皮质和海马发生了tau蛋白的过度磷酸化，这是AD发病的重要病理生理过程，神经元内过度磷酸化的tau蛋白聚集形成NFT，构成经典的AD特征性病理改变。脑低灌注大鼠大脑皮质和海马ChAT表达明显降低，提示胆碱能神经元受损或数目减少，推测由其催化生成的产物乙酰胆碱也减少，乙酰胆碱是重要的神经递质，与高级神经功能活动密切相关，故学习记忆能力减退。AChE活性更是反映胆碱能神经递质的重要指标，海马AChE活性降低，也提示中枢乙酰胆碱量的减少和胆碱能神经功能紊乱。脑低灌注可能通过这些途径引发AD发病。 3．2 脑低灌注与tau蛋白过度磷酸化 tau蛋白是一种微管结合蛋白，对维持神经元轴突中微管的稳定起重要作用。而过度磷酸化的tau蛋白一方面影响tau与微管的结合，破坏神经元中物质转运，神经元呈退行性变化；另一方面构成双股螺旋细丝，沉积在神经元内形成NFT，也参与神经细胞外SPS的形成。本实验中脑低灌注模型大鼠大脑皮质和海马Pser404-Tau表达增加，可能与脑低灌注时磷酸化状态的改变有关，局灶性脑缺血后也有类似现象。这也可能是脑血管病患者更易发生AD的原因之一。 3．3 脑低灌注与胆碱能神经损害 脑内的胆碱能系统损害在AD发病中起重要作用，胆碱能神经元丢失的严重程度与AD症状的轻重相关。AD患者尸检或脑活检显示，前脑基底核内胆碱能神经元变性以致死亡，突触前乙酰胆碱的合成、AChE和ChAT活力改变，突触后M受体数量减少。本实验中脑低灌注术后21d，大脑皮质和海马ChAT活性以及海马AChE活性明显降低，与人类AD脑内胆碱能神经功能改变相似。ChAT和AChE均是乙酰胆碱的代谢酶，由神经元胞体合成，推测脑低灌注状态下血氧供应下降，抑制了三羧酸循环，能量供应不足，而使ChAT和AChE合成减少；也可能是支配海马的基底前脑胆碱能神经元受缺血损害，突触数量减少所致。由于AChE活性部位是乙酰胆碱的阳性部位，AChE的作用底物是乙酰胆碱，故AChE活性的改变可直接反映乙酰胆碱的代谢情况，从而在一