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苗药肤痔清软膏微生物限度检查方法验证试验探究摘要目的：建立肤痔清软膏微生物限度检查方法。方法：以3株细菌、2株真菌对肤痔清软膏进行微生物限度检查方法的验证试验。结果：试验组枯草芽孢杆菌、白色念珠菌采用培养基稀释法回收率为88％以上：大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、黑曲霉采用常规法回收率为85％以上；控制菌检查试验组采用100ml增菌培养基，可检出金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌；采用200ml疱肉培养基可检出生孢梭菌。结论：经验证肤痔清软膏微生物限度检查采用培养基稀释法检查梭菌、细菌、霉菌和酵母菌；常规法检查金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌。 关键词　茁药肤痔清　微生物限度检查方法 肤痔清软膏是由黄柏、土大黄、金果榄等组成的复方制剂，苗医：旭嘎凯沓痂，样丢象泱安，滁内挡祛卡。陡：嘎久杠工浆店羌，罗欧，岗俺，阴高坳。中医：具有清热解毒，化瘀消肿，除湿止痒功能，常用于湿热蕴结所致手足癣、体癣、痔疮肿痛出血、带下病等在微生物限度常规检验中，微生物的检出率都较低。为保证检验方法的科学性、可行性及结果的准确性，本试验用2005年版《中国药典》规定的3株细菌、2株真菌(大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、黑曲霉、白色念珠菌)对3批肤痔清软膏进行了微生物限度检查法的验证试验研究，以确认所采用的方法是否适合于该药品的细菌、霉菌、酵母菌数的测定和控制菌检验及检查药品本身污染微生物的状况。 1　材料 1．1　仪器YJA-电动匀浆仪(台州市椒江五星试压设备有限公司)，SE2020电子天平(梅特勒－托利多常州衡器有限公司)，二氧化碳培养箱(美国SHELLAB)。 1．2　培养基营养琼脂培养基(批号031142)、营养肉汤培养基(批号50121)、玫瑰红钠琼脂培养基(批号040202)、BL培养基(批号050321)、pH7.0氯化钠一蛋白胨缓冲液(批号060223)，北京三药科技开发公司；氯化钠(批号041011)，成都五环高欣化学试剂厂；疱肉牛肉粒(批号060314)，北京陆桥技术有限责任公司。 1．3　供试品肤痔清软膏(批号2006040520060601)。 1．4　菌种大肠埃希菌[CM-cc(B)44102]、枯草芽孢杆菌[cMCC(B)63501]、金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26003]、黑曲霉[CMCC(F)98003]、白色念珠菌[CMCC(F)98001]、生孢梭菌[CMCC(B)64941]均由中国药品生物制品检定所提供。 2　方法与结果 2．1　菌液制备将上述5株菌的新鲜培养物分别接种至规定培养基，细菌培养16h；酵母菌培养24h；霉菌培养5d，按《中国药典》2005年版二部附录方法制备菌(孢子)悬液，备用。 2．2　供试液制备按规定取供试品10g，按《中国药典》2005年版一部附录方法制成1:10供试液，备用。 2．3　细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证 2．3．1　试验组供试液1ml和50～100CFU试验菌，分别注入平皿中，每株菌平行制备2个平皿。 2．3．2　菌液组测定所加的试验菌数。 2．3．3　供试品对照组取试验组供试液注皿量，测定供试品本底菌数。 2．3．4　回收率计算回收率％=[(试验组平均菌落数-供试品对照组平均菌落数)÷菌液组平均菌落数]×100％ 2．3．5　结果判断　在3次平行试验中，试验组的菌回收率均应在70％以上；若低于70％，应采用适宜的方法消除供试品的抑菌活性，重新进行验证试验。 预试验 取供试液1，0.50，0.33，0.2ml分别注1皿为一组，每组加入1种试验菌菌液，共5组。枯草芽孢杆菌1，0.50．0.33ml-1的回收率分别为45.8％，67.6％，84.5％，黑曲霉1，0.50ml-1的回收率分别为69，83.6％，白色念珠菌0.2-1的回收率为96.2％，其余2株菌1ml-1的回收率均达80％以上。 根据预试验结果，白色念珠菌、枯草芽孢杆菌、黑曲霉分别采用培养基稀释法0.2ml-1(1 ml分注5皿)、0.33ml-1(1 ml分注3皿)、0.5ml-1(1 ml分注2皿)其余2株菌采用常规法1ml-1进行验证试验。 结果见表(表试验组数据除白色念珠菌、枯草芽孢杆菌、黑曲霉为10皿、6皿、4皿平均值外，其余2株菌及菌液组均为2皿平均值)。 2．4　控制菌检查方法的验证 2．4．1　试验组供试液10ml及10～100CFU铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、生孢梭菌加入相应培养基中，按《中国药典》2005年版一部附录铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、梭菌检查法检查。 2．4．2　阴性菌对照组　方法同试验组，以大肠埃希菌作为阴性对照菌。 2．4．3