蛋白免疫印迹法(WB)试验结果及HIV感染关系研究.doc

蛋白免疫印迹法(WB)试验结果及HIV感染关系研究【摘要】 目的 通过对蛋白免疫印迹法(WB)试验结果的观察,确定个体是否感染HIV以及HIV感染的状况。方法 对60份抗-HIV初筛阳性血清使用蛋白免疫印迹法(WB)进行确认实验。结果 在被检测样品中,HIV-1型确认试验阳性54例,占90%;HIV-1型确认试验阳性,且提示HIV-2阳性感染1例,占1.6%;HIV-1型确认试验弱阳性(不确定)3例,占5%;HIV-1型确认试验阳性2例,占3.3%。结论 蛋白免疫印迹法(WB)试验确定个体有无HIV感染以及HIV感染情况提供依据。 【关键词】 HIV感染;蛋白免疫印迹法(WB);条带 【Abstract】 Objective Through to western blot assay observation of result of the test, confirm individual infect HIV and HIV infect the state.Methods Safe the positive serum and use western blot assay to confirm to cases of 60 persist-HIV positive for the first time.Results Being measured in the sample, HIV-1 types confirm testing 54 cases of positive,takes 90%.HIV-1 types confirms testing positive,and point outHIV-2 infect one positively,takes 1.6%.HIV-1 types confirm testing weak positive 3,takes 5% HIV-1 type confirm testing negative 2,take 3.3%.Conclusion Western Blot Assay test offers basis on confirm whether individuals have HIV is infected and HIV infect the state. 【Key words】 HIV infect;Western Blot Assay;Strip 作者单位:455000河南省安阳市肿瘤医院检验科 艾滋病(AIDS)是一种目前尚无有效治愈方法,病死率极高的传染病,它在全世界的广泛流行已经成为严重的公共卫生问题和社会问题。截止到2007年7月底,我们对60名抗-HIV初筛阳性者进行了蛋白免疫印迹法(WB)确认实验,通过实验结果(蛋白带条)的观察,探讨与HIV感染关系,并且还可以在监控病情进展,观察治疗结果,综合监测和行为干预等方面起到重要作用,现将结果报告如下。 1 试剂与方法 1.1 试剂 人类免疫缺陷病毒(HIV 1+2)型抗体免疫印迹试剂盒(新加坡健利检验诊断私人有限公司提供)。 1.2 仪器 脱色摇床:江苏TS-1。 1.3 方法 过夜孵育法 1.3.1 试剂的配制 1.3.1.1 稀释洗涤缓冲液 将1体积的浓缩洗涤缓冲液(20X)加入到19倍体积的双蒸馏水中,充分混匀。 1.3.1.2 封闭缓冲液 1体积的浓缩样品稀释缓冲液加入到9倍体积的双蒸馏水中,充分混匀,每毫升加入1 g封闭粉,充分混匀。 1.3.1.3 酶结合物工作溶液 按1:1000比例,用上述配好的封闭缓冲液稀释酶结合物。 1.3.2 试验步骤: 1.3.2.1 用镊子小心取出需要的试剂膜,有号码的一端向上,分别放入孵育板槽内。强阳性对照、弱阳性对照、阴性对照各一条。 1.3.2.2 每槽内加入2 ml稀释的洗涤缓冲液,在室温下(25±3)℃将孵育板置摇床上振荡孵育至少5 min,以吸引器吸出缓冲液。 1.3.2.3 在每槽中加入2 ml上述配好的封闭缓冲液,随后分别加入2 ml患者血清和强阳性、弱阳性、阴性对照。 1.3.2.4 盖上盖子,于室温下(25±3)℃在摇床上过夜(16～20 h)振荡孵育。 1.3.2.5 小心掀开盖子以避免溅出或样品交叉,以吸引器吸出反应液。不用的样品槽间需要更换吸头以避免交叉污染。 1.3.2.6 每槽中加入2 ml的洗涤缓冲液,每次置摇床上振荡5 min。弃洗液,再重复两次。 1.3.2.7 每槽中加入2 ml酶结合物工作液,盖上盖子,于室温下(25±3)℃在摇床上振荡孵育30 min。 1.3.2.8 仔细打开盖子,吸出酶结合