高效液相色谱法测定复方虎杖片中大黄素含量.docVIP

高效液相色谱法测定复方虎杖片中大黄素含量【摘要】 目的 建立用高效液相色谱法测定复方虎杖片大黄素含量的方法。方法 用phenomenexprodigy ODS3（250 mm×4．6 mm，5 μm）色谱柱，流动相：甲醇-0．1%磷酸溶液（85∶15），流速：1．0 ml/min，检测波长：254 nm，进样量为5 μl。结果 对照品线性范围为12．02～72．14 μg /ml，平均回收率为100．69%， RSD=1．42%（n=6）。结论 该方法简便可行，重复性好，能有效控制复方虎杖片的质量。? 【关键词】复方虎杖片； 大黄素； 高效液相色谱法 复方虎杖片原标准收载于《卫生部药品标准》中药成方制剂第三册，只有鉴别、检查项目，专属性差；没有建立含量测定方法，属国家药品标准提高行动计划品种。该品种由虎杖提取物、功劳木提取物、枇杷叶提取物组成，具有清热、祛痰、止咳、平喘，用于慢性支气管炎。因虎杖提取物在成药之中所占比重较大，主要活性成分有大黄素、大黄素甲醚、大黄酚、芪三酚、芪三酚苷等。由于产地不同，采挖季节不同，主要成分的含量也有很大的差别，同时芪三酚、芪三酚苷未有符合含量测定要求的对照品，因此，为控制其质量，本实验采用高效液相色谱法测定其大黄素的含量，以其作为指标性成分，从而达到控制产品质量的目的。? 1 仪器、试剂与样品? 仪器：TU-1901 紫外可见分光光度计，sartorius CP225D 电子分析天平，岛津LC-2010A全自动高效液相色谱仪，Lcsolution 工作站，KQ-400KDB 数控超声波清洗器。? 对照品：大黄素对照品（批号：110756-200110中国药品生物制品检定所，供含量测定用，纯度为100．00%，符合定量测定要求）。? 试剂与样品：甲醇为色谱纯，水为高纯水，其他制剂均为分析纯。复方虎杖片及缺虎杖的阴性对照样品（广西河丰药业有限公司提供）。? 2 方法与结果? 2．1 色谱条件 色谱柱 phenomenexprodigy ODS3（250 mm×4．6 mm，5μm），流动相：甲醇-0．1%磷酸溶液（85∶15）[1,2]，流速：1．0 ml/min，检测波长：254 nm，柱温：30℃。理论塔板数（n）按大黄素峰计算，应不低于9000，进样量为5 μl。? 2．2 对照品溶液的制备 精密称取五氧化二磷减压干燥24 h大黄素对照品适量，加甲醇制成每1 ml含0．5 mg的备用溶液，作为对照品贮备液。另精密量取贮备液适量，加甲醇制成每1 ml含30 μg的溶液，作为对照品溶液，即得。? 2．3 供试品溶液的制备 取本品，除去包衣，研细，混匀，取0．1 g，精密称定，加0．5 mol/L硫酸溶液20 ml，加氯仿30 ml，80℃水浴回流2．5 h，分取氯仿层，酸液用氯仿提取3次，每次10 ml，合并氯仿提取液，蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，置25 ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。精密量取2 ml，置10 ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。? 2．4 阴性样品溶液的制备 取阴性样品，按2．3项方法制备阴性样品溶液。? 在上述色谱条件下,分别进样对照品、供试品、阴性样品各5 μl，大黄素保留时间约为9 min，阴性样品对测定无干扰。见图1~3。? 2．5 线性关系考察 精密称取大黄素对照品10．02 mg，置100 ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1．2、2．4、3．6、4．8、6．0、7．2 ml，分别置10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，精密吸取上述溶液各5 μl，分别注入液相色谱仪，测定，记录峰面积，以峰面积（Y）对浓度（X）作图，得标准曲线，计算回归方程：Y=1．8248×104X-1．8952×102，r=0．9999，结果表明：大黄素在12．02～72．14 μg /ml线性范围内，浓度与大黄素峰面积呈良好的线性关系。见图4。 ? 2．6 精密度试验 取同一供试品溶液，重复进样6次，记录峰面积，结果RSD为0．14%。? 2．7 重复性试验取同一批样品6份，按上述方法测定大黄素的含量，结果RSD为1．26%。? 2．8 稳定性考察 取“2．7”项下供试品溶液，在0，4，8，12，16，20，24 h分别进样5 μl，记录峰面积，结果峰面积的RSD为0．19%，表明供试品溶液在24 h内均稳定。? 2．9 加样回收率试验 精密称取同一批次（061201批）样品，（大黄素含量为8．6578 mg/片，平均每片重为0．2624 g）约0．05 g。共取6份样，分别精密加入大黄素对照品储备液1．5 ml，按上述方法测定，计算加样回收率。结果平均回