中学生物实验中常用试剂配制和作用.doc

中学生物实验中常用试剂的配制及作用 徐以润 （江苏省灌南高级中学 江苏连云港 222500） 1.碘液 配制：取2g碘化钾 ，溶解在5ml蒸馏水中，再加1g碘，待溶解后用蒸馏水稀释至300ml。溶液在光亮处容易变成紫色，必须保存在暗色玻璃瓶里。 作用：用来测定淀粉，淀粉遇碘后，形成紫色的复合物。 2.斐林试剂 配制：斐林试剂(Fehlings solution)是德国化学家斐林（Hermann von Fehling，1812年--1885年）在1849年发明的。斐林试剂斐林试剂A和斐林试剂B配制而成的。斐林试剂A是氢氧化钠的质量分数为0.1 g/mL的溶液，斐林试剂B是硫酸铜的质量分数为0.05 g/mL的溶液。临用时斐林试剂A与斐林试剂B等量混合。 作用：鉴定还原性糖：C6H12O6、果糖、麦芽糖、乳糖等。 还原性糖与斐林试剂发生作用，水浴加热，生成砖红色沉淀。如用于鉴定组织液中是否有还原性糖、糖尿病人尿成分分析、酶专一性探索等。 3.班氏尿糖定性试剂 配制：173克柠檬酸钠和100克无水碳酸钠溶解于800毫升水中。再取17.3克结晶硫酸铜溶解在100毫升水中，慢慢将此溶液加入上述溶液中，最后用水稀释到1升，边加边搅，如产生沉淀可滤去。 作用：鉴定还原性糖，在沸水浴加热条件下与还原糖反应而生成砖红色的Cu2O沉淀，使用原理同斐林试剂，都是二价铜离子与醛基在沸水浴加热条件下反应而生成砖红色的沉淀，所不同的是班氏试剂可长期使用。 4.双缩脲试剂 配制：双缩脲试剂（biuret reagent）是由双缩脲试剂A(NaOH)和双缩脲试剂B(CuSO4)两种试剂组成。双缩脲试剂A的成分是氢氧化钠的质量分数为0.1 g/mL的水溶液；双缩脲试剂B的成分是硫酸铜的质量分数为0.01 g/mL的水溶液。 作用：鉴定蛋白质，蛋白质与双缩脲试剂发生作用，可产生紫色反应。也可用于鉴定多肽。双缩脲试剂使用时，先向2mL蛋白质溶液加入2mL双缩脲试剂A，振荡摇匀，造成碱性的反应环境，然后再加入3~4滴双缩脲试剂B，振荡摇匀后观察现象。 具体方法是先将双缩脲试剂A加入组织样液，振荡均匀（必须营造碱性环境），再加入双缩脲试剂B，摇荡均匀。如果组织里含有蛋白质，那么会看到溶液变成紫色。具有两个或两个以上肽键的化合物皆可与双缩脲试剂产生紫色反应。蛋白质的肽键在碱性溶液中能与Cu2+络合成紫红色的络合物。颜色深浅与蛋白质浓度成正比。 5.苏丹Ⅲ染液 配制：苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ干粉0.1g；95%酒精10 ml；过滤后再加入10 ml甘油 。或者取0.1克苏丹Ⅲ，溶于20毫升95%酒精中，即成0.5%苏丹Ⅲ染液。 作用：鉴定脂肪，脂肪可以被苏丹Ⅲ染成橘黄色（或被苏丹Ⅳ染成红色）。 6.健那绿染色剂 配制：配制质量分数为1%健那绿染液: 将0.5g健那绿溶解于50mL生理盐水中,加温到30-40摄氏度,使其充分溶解。 作用：专一性用于线粒体染色的活细胞染料。将线粒体染成蓝绿色 7.吡罗红甲基绿染色剂 配制 ： ①染色剂A液的两种配制方法 第一种方法：取吡罗红甲基绿粉1 g，加入到100 mL蒸馏水中溶解，然后用滤纸过滤，将滤液放入棕色瓶中备用。 第二种方法：取甲基绿2 g溶于98 mL蒸馏水中，取吡罗红G 5 g溶于95 mL蒸馏水中。取6 mL甲基绿溶液和2 mL吡罗红溶液加入到16 mL蒸馏水中，即为A液，放入棕色瓶中备用。 ②染色剂B液的配制方法 B液是一种缓冲液，由乙酸钠和乙酸混合而成。先取乙酸钠16.4 g，用蒸馏水溶解至1 000 mL备用；再取乙酸12 mL，用蒸馏水稀释至1 000 mL备用。取配好的乙酸钠溶液30 mL和稀释的乙酸20 mL，加蒸馏水50 mL，配成pH为4.8的B液（缓冲液）。 ③吡罗红甲基绿染色剂是由A液、B液混合配制而成的。取A液20 mL和B液80 mL混合，就是实验中所用的吡罗红甲基绿染色剂。应该注意的是该试剂应现用现配。 作用：甲基绿可以给DNA染色，使DNA呈现绿色。吡罗红可以给RNA染色，使RNA呈现红色。 8.质量浓度为0.3g/ml的蔗糖溶液 配制：30g蔗糖溶解于蒸馏水中，并稀释至100毫升。 作用：观察成熟植物细胞质分离时用。经此处理细胞仍具活性。 9.层析液 配制：由20份石油醚（在60~900C下分馏出来的）、2份丙酮和1份苯混合而成。代用品：93号汽油、95%的酒精溶液。 作用：是一种脂溶性很强的有机溶剂，叶绿体中的色素在层析液中的溶解度不同：溶解度高的随层析液在滤纸上扩散很快；溶解度低的随层析液在滤纸上扩散得慢。 10.解离液 配制：质量分数为15%的盐酸和体积分数为95%的酒精溶液等量混合。 作用：用于洋葱根尖的解离，能杀死细胞，并使组织中的细胞相互分离开来。 11